[发明专利]一种灭螺细菌及其制备生物灭螺剂的方法

说明书

本发明公开了一种灭螺细菌及其制备生物灭螺剂的方法，所述灭螺细菌Enterobacter cloacae，B2，其生物保藏号为CCTCC M 2014103，该灭螺细菌CCTCC M 2014103为阴沟肠杆菌，是从柏树枝叶中筛选获得的，能够快速有效地杀灭钉螺。与现有微生物相比较，本发明提供了一种可以杀灭钉螺的细菌，可以直接作为生物灭螺剂使用，用该灭螺细菌CCTCC M 2014103制备的生物灭螺剂与传统化学灭螺剂相比，制备方法简单，成本低，对环境友好。

技术领域

本发明涉及一种微生物，尤其涉及一种灭螺细菌及其制备生物灭螺剂的方法。

背景技术

钉螺作为血吸虫唯一的中间宿主，其繁衍和分布与血吸虫病的流行传播密切相关，所以抑螺灭螺被认为是阻止血吸虫病传播的重要途径。目前主要的灭螺剂是化学药物类，这类药物容易对环境造成不可逆破坏。近年来植物内微生物群落结构得到广泛的关注和研究，国内外学者经过研究发现植物体内存在大量的微生物，这些微生物在动物的生长、发育、健康等方面都起到重要作用，因此，本发明将研究的方向对准了植物内的微生物群落，希望能找到一种选择性强、对环境影响较小的生物灭螺剂，以替代传统化学灭螺剂，保护环境。

发明内容

本发明的目的就在于提供一种解决上述问题，选择性强、对环境影响较小的灭螺细菌及其制备生物灭螺剂的方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种灭螺细菌，分类命名为Enterobacter cloacae B2，所述灭螺细菌的生物保藏号为CCTCC M 2014103，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏日期为2014年3月26日；

一种构建CCTCC M 2014103的方法，所述方法包括以下步骤：

a.培养基的制备：

1)YEB液体培养基：牛肉浸膏为5.0g/L，酵母膏为1.0g/L，蛋白胨为5.0g/L，MgSO4·7H2O为4g/L，蔗糖为5.0g/L，pH7.0～7.5；

2)YEB固体培养基：将上述YEB液体培养基中加入15g/L的琼脂；

b.进行筛选：

1)在无菌条件下，取新鲜柏树枝叶，用体积分数为75％的酒精浸泡1分钟，0.1％升汞浸泡12分钟，无菌生理盐水冲洗3遍后，将柏树枝叶研磨，获得组织碎末；

2)将上一步骤的组织碎末接种到100mL的YEB液体培养基中，37℃培养12～16小时，培养的转速为180rpm，获得培养液；

3)按体积计，将上一步骤的培养液用无菌生理盐水依次稀释为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6和10^-7，获得稀释液；

4)将上一步骤的稀释液涂于YEB固体培养基上，37℃培养12～16小时，挑取单菌落进行纯化，即获得所述灭螺细菌CCTCC M 2014103；

c.获取PCR扩增产物并检测；

作为优选，步骤c中，将上述纯化后的灭螺细菌CCTCC M 2014103接种到YEB固体培养基上，37℃培养12～16小时，挑取单菌落进行菌落PCR，所述菌落PCR的引物为细菌16SrRNA通用引物27F和R518，所述引物的序列为：

SEQ NO.2：27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG

SEQ NO.3：R518：ATTACCGCGGCTGCTGG；