[发明专利]一种过表达gma-miR156b培育高产株型植物的方法

权利要求书

1.序列表中SEQ ID NO：1所示microRNA的在培育多分枝和/或多荚和/或多籽粒株型植物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：在植物中过表达SEQ ID NO：1所示的microRNA，培育出具有多分枝和/或多荚和/或多籽粒株型的转基因植物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：首先构建含有所述microRNA前体序列的重组表达载体，然后利用此重组表达载体构建转化体，再利用此转化体侵染目的植物，筛选得到与正常植物相比具有多分枝、多荚、多籽粒的高产转基因植物；所述microRNA的前体序列如SEQ ID NO：2所示。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：构建含有SEQ ID NO：2所示多核苷酸序列的重组表达载体的步骤为：

1)、首先以植物叶片DNA为模板，扩增获得SEQ ID NO：2所示多核苷酸序列并连接至T载体上，然后用限制性内切酶Age I和BamH I酶切所得T载体质粒，回收酶切产物；

2)、然后用限制性内切酶Age I和BamH I酶切空载体pEGAD，回收载体骨架；

3)、最后用T4连接酶将步骤1)的酶切产物和步骤2)的载体骨架连接；

4)、将步骤3)的连接产物热激转化大肠杆菌感受态DH5α菌株，37℃过夜培养，挑取阳性克隆进行测序验证，得重组表达载体pEGAD-35S::gma-miR156b。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：采用液氮冻溶法转化农杆菌EHA105得转化体，具体操作步骤包括：

a.取出冻存的200μl感受态农杆菌细胞，融化后加入5-10μl重组表达载体的质粒DNA，轻弹管壁混匀，冰上放20-30min；

b.放入液氮中5min后取出，将管转入37℃、5min融化后，加入800μlYEP液体培养基，28℃低速振荡、150rpm，4-5h；

d.10000rpm，30sec,去上清，加100μlYEP液体培养基，悬浮菌体后涂板；

e.置于28℃培养至白色转化子长出，挑取阳性单克隆摇菌，用于植株子叶节转化。

6.根据权利要求1-5任一项所述的应用，其特征在于：所述目的植物为大豆或小麦。

7.权利要求1所述microRNA的前体序列，其具有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，在植物细胞内被剪切并表达得到对应的microRNA。

8.含有权利要求7所述microRNA前体序列的重组表达载体。

9.含有权利要求7所述microRNA前体序列的转化体

10.扩增权利要求7所述microRNA前体序列的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。