[发明专利]一种使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺

权利要求书

1.一种使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺，其特征是包括如下制作步骤，浓度按质量百分比：

将肝素钠粗品溶于浓度为2％的氯化钠溶液中，采用酶解法酶解，对酶解液用阴离子交换树脂充分吸附；

步骤A中的阴离子交换树脂用浓度为3.0%-6.0%的氯化钠溶液进行洗脱，得到洗脱液经乙醇沉淀烘干得到洗脱物；

步骤B中得到的洗脱物溶为10.0%浓度，调节pH值为8.0-8.5，添加洗脱物重量2.0%-3.5%的CaCl₂，后添加洗脱物重量3.0%-4.5%的Na₂CO₃充分搅拌反应，将沉淀过滤除去得到上清液；

将步骤C中的上清料液调节pH值为6.0-7.0，温度20-40℃，加入硫酸软骨素ABC酶量为：酶/洗脱物=1000-2000 IU/Kg，搅拌酶解8-12h；或调节上清料液pH值7.0-8.5，温度20-40℃，加入硫酸软骨素B酶量为：酶/洗脱物=1500-2500 IU/Kg洗脱物，搅拌酶解8-12h；

将酶解液用C步骤再次除蛋白，调pH值至7.0，用3K超滤膜进行超滤3-4h，取截留液用乙醇1.5-2.0倍沉淀；

将步骤E所得沉淀物用纯化水溶解，加入乙二胺四乙酸EDTA进行搅拌、吸附、过滤，滤液用1.5-2.0倍药用乙醇沉淀，所得的沉淀物溶解并用双氧水氧化4h；

将步骤F所得料液加入1.5-2.0倍药用乙醇沉淀，弃上清，所得固体沉淀物再用纯化水溶成10%浓度，经0.22微米滤芯过滤，然后真空冷冻干燥，最终得到硫酸乙酰肝素精品。

2.根据权利要求1所述的使用硫酸软骨素酶生产硫酸乙酰肝素的工艺，其特征是：所述的酶解法是指：

调节步骤A的肝素钠溶液pH值8.0-8.5、温度35-38℃，加入肝素钠粗品重量的1.0%-2.0%的胰蛋白酶解3-4h，酶解完毕调料液pH值7.0-7.5，用强碱型阴离子交换树脂对其充分吸附。