[发明专利]亲和丙型病毒性肝炎核心抗原的核酸适体及其应用

说明书

本发明公开了一种亲和丙型病毒性肝炎核心抗原的核酸适体及其应用。本发明所提供的核酸适体，是如下(a)或(b)：(a)序列表的序列2所示的单链DNA；(b)含有(a)所述核酸适体的单链DNA。利用本发明的核酸适体，可以捕获溶液中的丙型肝炎病毒核心抗原，也可以检测溶液中的丙型肝炎病毒核心抗原，将有利于丙型肝炎血清学诊断和血液筛查。利用本发明的核酸适体，部分代替单克隆抗体捕获核心抗原进行丙型肝炎检测，具有高灵敏、成本低、易制备、易保存的优点。本发明具有很高的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种亲和丙型病毒性肝炎核心抗原的核酸适体及其应用，具体涉及一种亲和丙型病毒性肝炎核心抗原的核酸适体及其在辅助鉴定丙肝患者中的应用。

背景技术

丙型病毒性肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的一种传染性疾病，可以通过血液或血制品感染。目前全世界有近2亿人感染HCV，我国约有4000万至5000万人感染HCV，仅次于乙型肝炎携带者数量。由于丙肝是RNA病毒引起的，目前世界范围内尚未开发出有效的HCV疫苗。丙肝只有早发现、早治疗，才能减轻病毒对肝细胞的破坏。因此，探索、开发新型的HCV早期检测方法具有非常重要的意义。

判断是否感染丙肝的唯一办法是做丙肝血清检测。目前丙型病毒性肝炎的血清学诊断方法包括检测抗HCV抗体和HCV RNA。抗HCV抗体一般出现在感染HCV12周后，并且有相当一部分病人体内无抗HCV抗体，不利于对HCV的早期诊断。HCV RNA多出现于病毒感染1周后，但临床检测易出现假阳性和假阴性结果。因此这些诊断方法或多或少的存在窗口期检测效果不理想、检测技术操作复杂、仪器昂贵、大批量筛查能力不足等局限性，离早期诊断与临床血液或血制品筛查的要求还有相当差距。已知HCV基因组编码约3100个氨基酸残基组成的多聚蛋白，该蛋白在机体与病毒蛋白酶作用下可分解为核心抗原(core)、E1结构蛋白、E2结构蛋白及p7非结构蛋白、NS2非结构蛋白、NS3非结构蛋白、NS4A非结构蛋白、NS4B非结构蛋白、NS5A非结构蛋白、NS5B非结构蛋白。HCV core蛋白出现于HCV感染1周后，可作为HCV早期诊断及临床筛查指标，有望实现窗口期检测。

在国际上美国ORTHO公司于2000年推出了第四代HCV-ELISA试剂盒就是基于HCVcore蛋白的检测。在国内，2005年湖南康润生物工程有限公司也生产了类似的检测HCV病毒试剂盒。尽管这些试剂盒能够检测HCV抗原，但是因为这些试剂盒均采用双抗体夹心酶联法(ELISA)进行检测，所以需要进行大量单克隆抗体的制备。然而单克隆抗体的制备过程复杂，价格昂贵，保存条件苛刻。这使得检测HCV病毒的成本较高，检测灵敏度也受到严重的影响。

核酸适体(Aptamer，又称适配体，适配子)是能高亲和性、高特异性的结合某种生物靶标的单链寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。核酸适体是通过指数富集配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment,SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高度特异性结合靶标分子的单链DNA/RNA。已报道核酸适体的靶标包括金属离子、有机小分子、多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸适体的分子识别功能与抗体类似，具有与抗体分子相当甚至更强的靶标识别能力，但与抗体相比具有很多优良的特性，如分子量小、能批量生产、不易失活、无免疫原性、容易合成与标记、快速的穿透组织、良好的代谢动力学、不同批次之间产品不会存在差异和具有很好化学稳定性，在生物检测、疾病诊断治疗等领域具有重要的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种亲和丙型病毒性肝炎核心抗原的核酸适体及其应用。

本发明提供的核酸适体，具体是如下(a)或(b)：

(a)序列表的序列2所示的单链DNA；

(b)含有(a)所述核酸适体的单链DNA。

所述(b)中的核酸适体具体可为序列表的序列1所示的单链DNA。