[发明专利]一种绿色球状体途径的泽泻蕨种苗组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明本发明属植物组织培养技术领域，具体涉及一种绿色球状体途径的泽泻蕨组培快速繁殖方法。

技术背景

泽泻蕨(Hemionitis arifolia)隶属于裸子蕨科泽泻蕨属，商品名：心愿蕨、心愿叶、心叶蕨。泽泻蕨属共8种，仅泽泻蕨1种产于亚洲，中国是该种分布的北界，主要分布于海南及云南南部。泽泻蕨叶片心形，叶型独特，具有良好的市场应用前景。

自然条件下，蕨类植物主要依靠孢子进行繁殖，但孢子繁殖的周期较长，通常需要6-18个月，甚至更长。

蕨类植物绿色球状体是指由蕨类植物外植体诱导得到的由众多绿色颗粒组成的球状体，其本质是分生组织集合体，接种于分化培养基上可以获得大量蕨类植物幼苗。蕨类植物的绿色球状体途径的组培繁殖方法是指：外植体——绿色球状体——植株，一旦诱导得到绿色球状体，其繁殖系数将高于孢子繁殖途径。

目前，大多数蕨类植物直接从地栽的活体植株上很难获得合适的外植体，诱导难度极大，获得蕨类植物绿色球状体的也较困难。到目前为止，蕨类植物中已获得绿色球状体的种类十分有限，这主要由于不同种类的蕨类植物绿色球状体的获得对于外植体的选取以及植物激素的种类和浓度具有一定的专一性，需经过大量筛选试验才能获知特定蕨类植物种类适宜的外植体种类以及植物激素种类和浓度。目前，尚无泽泻蕨绿色球状体途径组培繁殖技术的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术存在泽泻蕨通过孢子繁殖周期较长，缺乏新途径快速繁殖的缺陷，因此，本发明目的是提供一种通过绿色球状体途径组培快速繁殖泽泻蕨种苗的新方法。本发明技术方案如下：

一种绿色球状体途径的泽泻蕨种苗组培快繁方法，其特征在于步骤如下：

(1)泽泻蕨无菌外植体的获得

将泽泻蕨无菌孢子接种在1/2MS+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80的培养基上，培养条件为：20～25℃、每天的光照时间为12小时，光照强度为2000lx，得到幼嫩的无菌苗，以幼嫩无菌苗作为泽泻蕨无菌外植体；

(2)泽泻蕨绿色球状体的诱导

将步骤(1)获得的泽泻蕨无菌外植体接种于诱导培养基上进行培养，培养条件与步骤(1)相同，无菌苗茎尖和叶柄基部膨大形成原始的绿色球状体即为诱导得到的泽泻蕨绿色球状体；所述的诱导培养基为：1/6MS～1/4MS+TDZ0.4～1.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+水解酪蛋白400～800mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80；

(3)泽泻蕨绿色球状体的增殖

将步骤(2)诱导得到的泽泻蕨绿色球状体分割为直径2～5mm的球状体，接种于增殖培养基上进行培养，培养条件与步骤(1)相同；所述的增殖培养基为：1/6MS～1/4MS+TDZ0.1～0.3mg/L+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+水解酪蛋白400～800mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80；

(4)泽泻蕨绿色球状体的分化

将步骤(3)增殖后的泽泻蕨绿色球状体分割为直径2～5mm的球状体，接种于分化培养基上进行培养得到分化幼苗，培养条件与步骤(1)相同；所述的分化培养基为：1/4MS～1/2MS+活性炭3～6g/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80；

(5)分化幼苗的培养

将步骤(4)得到的分化幼苗接种于分化幼苗培养基上进行培养得到组培苗，培养条件与步骤(1)相同；分化幼苗培养基为：MS+活性炭3-6g/L+蔗糖30.0g/L+琼脂浓度7.0g/L，pH为5.80；

(6)组培苗移栽培育

待步骤(5)所述组培苗苗高达到2～3cm时，在20～25℃、每天的光照时间为12小时、光照强度2000lx条件开盖炼苗2～3天，将炼苗后的组培苗除去根部的培养基，并用质量分数为0.1～0.125％百菌清溶液清洗根部，种植于装有基质的育苗盒内，育苗盒内所用基质为草炭：河沙：珍珠岩的体积比为3:1:1的混合基质，再将育苗盒放置塑料棚里，控制棚内温度为20～25℃，在自然光照下生长10～15天即得到泽泻蕨商品种苗。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明方法繁殖效率特别高。