[发明专利]分离纯化高纯度青蒿酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物化学领域，更进一步的涉及一种从酿酒细胞中分离纯化高纯度青蒿酸的方法。

背景技术

我国科学工作者于二十世纪70年代首次从中药青蒿即菊科植物黄花蒿（ArtemisiaannuaL.）中分离出青蒿素，是一个含氧桥的倍半萜内酯类化合物，是中国发现的第一个被国际公认的天然药物。青蒿素不仅对多种对氯喹、甲氟喹、抗乙胺嘧啶等抗疟药具有搞药性的疟药具有抗药性的疟原是有显著的治疗效果，而且还具有很好的治疗肝炎、抑制肿瘤细胞生长、杀血吸虫等作用。

目前青蒿素主要有如下几种方法获得：

一、从中药青蒿即菊科植物黄药蒿的叶和花蕾中分离获得，这种方法仍然是青蒿素的主要来源。天然青蒿中青蒿素含量很低（0.01%~0.6%，少数能达到1%）。此外，不同基因型青蒿以及青蒿不同组织之间的青蒿含量差异很大。由于青蒿的采购、收获，直至工厂加工提取，环节较多，费时费力，且不同采集地和不同采集期青蒿品质有很大的差别，同时，大量采集自然资源，必然会破坏环境和生态平衡，导致资源枯竭。因此，通过扩大青蒿素的提取量，这种方式不能满足人们对青蒿素的日益高涨的需求。

二、通过细胞或愈伤组织来生产青蒿素。此以二氢青蒿酸为原料，采用光化学的方法来引入过氧键。由于光化学自身的限制，如操作繁琐，不宜大规模生产，因此很难实现工业化生产。

三、通过将青蒿素生物合成基因在微生物中组合表达，在微生物中重新组建青蒿酸生物合成途径，利用“微生物工厂”来生产青蒿素。此种方法可简便大量的获得清蒿酸，再以半合成的方式获得青蒿素。该方法可大规模工业生产，生产成本相对较低。

专利CN102718773公开了一种由青蒿酸制备表蒿素的方法。首先青蒿酸在还原剂如硼氢化钠/氯化镍或氢气/金属催化剂作用下得到二氢青蒿酸。然后，二氢青蒿酸在催化剂存在下被过氧化物氧化成过氧化二氢青蒿酸。最后在酸的催化下与氧气作用下高收率地得到目标产物。该方法合成路线短，反应选择性高，制备过程对环境有好，操作及后处理简单，总收率高等优点。

青蒿酸是半合成青蒿素的一种重要的中间体，因此，急需找到一种高效的、低成本的获得高纯度青蒿酸的方法。

CN103087075A中采用有机溶剂萃取，碱性溶液处理，硅胶柱层析分离相结合的方法提取纯化青蒿酸。CN102702220A从青蒿素母液中提取青蒿酸，采用皂化、酸化、萃取、干法柱层析、精制五个步骤，分离纯化出高含量的青蒿酸，精制需要用到有机溶剂进行重结晶，操作复杂，结晶时间长。并且这些方法最后都采用了柱层析处理，大批量的柱层析分离，有机溶剂使用量大，带来严重的环境污染和安全隐患，并且提高了生产成本，不利于工业化生产。CN103467274A公开了一种从黄花蒿中提取青蒿酸的方法，包括使用CO₂超临界萃取，萃取液用活性炭脱色，浓缩后，无水甲醇重结晶，成本高，不适合工业化生产。CN103524525A公开了从青蒿素生产废弃物中提取青蒿酸的方法，包括先将废弃洗脱液进行浓缩，然后用有机溶剂加热溶解，降温后离心过滤浓缩，浓缩液用有机溶剂结晶。CN103570739A和CN103524527A也公开了从青蒿素废液中或青蒿素精油中分离提取青蒿酸的方法，都涉及使用有机溶剂进行重结晶，有机溶剂使用量大，环境不友好，生产成本高。

综上所述，现有的提取纯化青蒿酸的方法存在着分离效率低，操作复杂，成本高，不适合工业化生产等问题。

发明内容

为了克服现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提供一种从酿酒酵母细胞发酵液中分离纯化高纯度青蒿酸的方法，所述方法包括以下步骤：

a）、将发酵液固液分离得到菌丝体，干燥，得到干菌丝体；

b）、向步骤a）所得的干菌丝体中加入有机溶剂搅拌，过滤，收集滤液；

c）、用碱性水溶液洗涤步骤b）所得的滤液，合并有机层；

d）、将步骤c）所得的有机层浓缩成浓度为50~200g/L的青蒿酸溶液；

e）、向步骤d）所得的青蒿酸溶液中加入等体积水，然后在保温下，加入碱液，调节pH为10~14，搅拌，静置分层，收集水层；

f）、在加热条件下，向步骤e）所得的水层中加入酸液，调节pH为5~8，搅拌下结晶；

g）、将步骤f）所得的晶体加入纯水，加入碱液使晶体完全溶解。在加热条件下加入酸液调节溶液pH为5~8，搅拌下结晶，抽滤、干燥得到高纯度青蒿酸固体。

其中，步骤a）所述的干燥，优选在50℃~60℃条件下干燥；