[发明专利]一种免清洗的长时间细胞膜荧光成像试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种免清洗的长时间细胞膜荧光成像试剂，其特征在于：所述试剂为侧链含有膜锚定单元和低效率荧光单元的乙二醇壳聚糖，其中，膜锚定单元由疏水单元和聚乙二醇高分子组成，疏水单元通过聚乙二醇高分子链接到乙二醇壳聚糖的氨基上；低效率荧光单元是在水溶液中发光效率低，而在疏水性环境中发光强度大的荧光分子。

2.根据权利要求1所述的一种免清洗的长时间细胞膜荧光成像试剂，其特征在于：所述膜锚定单元占乙二醇壳聚糖重复单元数的百分比在5％到30％；所述低效率荧光单元占乙二醇壳聚糖重复单元数的百分比在1％到5％。

3.根据权利要求1所述的一种免清洗的长时间细胞膜荧光成像试剂，其特征在于：所述乙二醇壳聚糖的分子量为10000-100000。

4.根据权利要求1所述的一种免清洗的长时间细胞膜荧光成像试剂，其特征在于：所述膜锚定单元包括胆固醇、磷脂分子、烷烃和维生素E；所述疏水单元通过聚乙二醇高分子链接到乙二醇壳聚糖的氨基上，所述聚乙二醇高分子分子量在500以上。

5.根据权利要求1所述的一种免清洗的长时间细胞膜荧光成像试剂，其特征在于：所述低效率荧光单元为羧基化的尼罗红染料或羧基化的四苯基乙烯，其通过与氨基反应直接链接到乙二醇壳聚糖上，或通过短链PEG链接到乙二醇壳聚糖的氨基上。

6.一种免清洗的长时间细胞膜荧光成像试剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)取膜锚定单元和乙二醇壳聚糖分别溶于PBS缓冲液中，混匀，室温反应；产物透析、冻干；

(2)在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺存在下，产物和低效率荧光单元分子室温反应，纯化即得；其中，所述低效率荧光单元是在水溶液中发光效率低，而在疏水性环境中发光强度大的荧光分子。