[发明专利]联合使用不同核的一维核磁共振混合物定量方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学方法领域，具体涉及一种利用核磁共振技术测定混合物中各种化合物含量的方法，更具体地说，涉及一种联合使用不同核的一维核磁共振方法测定混合物中含不同元素的多个化合物的含量的方法。

背景技术

核磁共振(NMR)在化学结构研究中已经成为一种必不可少的工具，因为它能够提供化学结构最详细的、最真实可靠的信息。除了定性，核磁共振还常用于定量分析，因为它有很多独特的优点：如不需要破坏化合物的结构，实验简单，以及信号的积分面积与自旋核的数量直接成正比等。

此前，已有单独采用氢、碳、磷、氟的一维核磁共振谱图进行定量分析的报道。其中，氢谱最常用，因为氢核在天然产物、代谢物以及合成的化合物中普遍存在，灵敏度极高。但是，对于混合物，氢谱通常信号较多，谱宽较窄，或因化学位移差别较小，从而导致信号重叠(或部分重叠)，因此仅依靠氢谱难以精确测定复杂混合物中单体化合物的含量，例如仅用氢谱很难准确测定生物样品中胆碱、磷酸胆碱和甘油磷酸胆碱的含量。

之前，为了克服生物样品中胆碱、磷酸胆碱及甘油磷酸胆碱因其氢谱中信号严重重叠而难以准确定量的问题，有报道采用磷编辑氢谱的方法，但该方法使用氢谱中信号强度较弱的亚甲基信号定量分析，强度仅是甲基信号的九分之二，并且该方法中使用磷滤波进一步降低信号强度。此外，为解决氢谱因信号重叠而难以用来进行定量分析的问题，二维核磁共振实验也是一个选择，例如¹³C-¹H HSQC实验。但经过二维脉冲系列，理论计算核磁信号的衰减因子相当复杂，其结果因化合物的环境不同等多种因素的影响而具有一定的不可靠性，且相对于一维实验，二维核磁共振实验的时间通常较长。因此有必要探索一种更为快捷简便，能够对混合物样品中单体，比如生物样品中各胆碱化合物(胆碱、磷酸胆碱和甘油磷酸胆碱)进行准确定量的方法。

发明内容

本发明的目的是，采用一种快捷简便的一维核磁共振实验方案准确测定混合物中多个单体化合物的含量，以解决常规氢谱中由于信号重叠而影响单个化合物的准确定量的问题。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

一种联合使用不同核的一维核磁共振方法，联合使用不同核的一维核磁共振图谱对复杂混合物中多个单体化合物进行定量分析或浓度测定，包括同时联合使用多种核的一维核磁共振图谱，并使用含有多种元素的同一化合物作为不同核的一维核磁共振定量分析的单一通用内标。

根据所述的方法，使用某种含有不同元素的化合物作为联合使用不同核的一维核磁共振方法的单一通用定量内标。

根据所述的方法，联合使用氢谱和磷谱定量分析方法，以三甲基氧膦作为单一通用内标。

根据所述的方法，联合使用氢谱、磷谱和氟谱定量分析方法，以同时含有氢、磷、氟元素的四甲基六氟磷酸铵作为单一通用内标。

根据所述的方法，该方法只关注待测混合物中某些化合物的相对浓度比例，计算相对浓度比例所得的结果，与内标本身的浓度无关，也不受通用内标的称量误差影响，能准确测定每种单体化合物的浓度或相对比例。

所述的一种联合使用不同核的一维核磁共振方法在测定混合物样品中化合物浓度中的应用，该方法使用在某种特定核的一维核磁共振图谱中出现特征信号峰重叠因而难以对各组分单体进行准确定量时，测定混合物中单体化合物中多种元素组成浓度。

所述的一种联合使用不同核的一维核磁共振方法在测定混合物样品中化合物浓度中的应用，用同时含有氢、磷元素的三甲基氧膦和叔丁基磷酸作为联合氢谱与磷谱进行定量分析的通用内标；用同时含有氢、磷、氟元素的四甲基六氟磷酸铵作为联合氢谱、磷谱与氟谱进行定量分析的通用内标。

所述的一种联合使用不同核的一维核磁共振方法在测定混合物样品中化合物浓度中的应用，由于测定混合物中某些化合物的相对浓度比例，计算相对浓度比例所得的结果时，与内标本身的浓度无关，不受通用内标的称量误差影响，能准确测定每种单体化合物的浓度或相对比例。