[发明专利]一种从痰液中提取核酸的试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种从痰液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：在痰液中加入消化液KB，震荡混合均匀，加入蛋白酶保温后，再加入结合液BS，震荡混合均匀后将溶液全部通过核酸吸附柱，样品中的核酸将结合到吸附柱的硅胶膜上，用洗涤液SWB1和SWB2分别洗涤吸附柱后，再用洗脱液将核酸从吸附柱上洗脱下来。

2.如权利要求1所述的一种从痰液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：消化液KB同时具有液化痰液和保存核酸的功能，与痰液混合均匀后，可放置于4℃1～30天，有效保护样本中的核酸不被降解。

3.如权利要求1所述的一种从痰液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：消化液KB的用量为痰液样本的1～10倍量。

4.如权利要求1所述的一种从痰液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：在消化液KB中，SDS的浓度为0.25g/L～0.95g/L，最适浓度为0.55g/L～0.75g/L；EDTA的浓度为0.05mmol/L～1.5mmol/L，最适浓度为0.06mmol/L～0.09mmol/L；吐温20的浓度为0.1％～6％，最适浓度为2.5％～3％；DTT的浓度为20mmol/L～100mmol/L，最适浓度为60mmol/L～85mmol/L；Tris-HCl浓度为20mmol/L～100mmol/L，最适浓度为50mmol/L～85mmol/L，最适pH为8.0～8.8。

5.如权利要求1所述的一种从痰液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：使用蛋白酶消化痰液中的蛋白，加入蛋白酶后，于37～65℃保温1～5小时进行酶解。

6.如权利要求1所述的一种从痰液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：在结合液BS中，盐酸胍的浓度为2mol/L～8mol/L，最适浓度为6mol/L～7mol/L；氯化钠的浓度为50mmol/L～1mol/L，最适浓度为150mmol/L～350mmol/L；Tris-HCl浓度为50mmol/L～500mmol/L，最适浓度为100mmol/L～180mmol/L，最适pH为5.8～6.4。

7.如权利要求1所述的一种从痰液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：洗涤液SWB1中，盐酸胍的浓度为3mol/L～7mol/L，最适浓度为4mol/L～5mol/L；Tris-HCl浓度为50mmol/L～500mmol/L，最适浓度为200mmol/L～280mmol/L，最适pH为5.8～6.4；乙醇浓度为50％～80％，最适浓度为65％～75％。

8.如权利要求1所述的一种从痰液中提取核酸的试剂盒及提取方法，其特征在于：洗脱液SWB2可以为纯水或pH值大于7.0的低盐溶液。