[发明专利]一种β-羟基羧酸酯羟基氧化酶的筛选方法

权利要求书

1.一种β-羟基羧酸酯羟基氧化酶的高通量筛选方法，其特征在于按照下述步骤进行：

（1）称取红球菌Rhodococcus sp. CCZU10-1静息细胞（湿重）悬浮于磷酸缓冲溶液体系（pH 7.0，100 mmol/L），细胞终浓度为10%（质量浓度）；加入终浓度为100 mmol/L的底物外消旋β-羟基羧酸酯混合均匀后在30℃、160 r/min 的条件下进行氧化转化反应；

（2）反应结束，利用等体积乙酸乙酯萃取萃取反应液；

显色是在24孔板中进行的；

萃取上清液：显色剂A（0.04 ~ 0.08 mol/L）：显色剂B（0.1 ~ 0.3 mol/L）的体积比为20:800:800 (μL: μL: μL)，在20~35℃下显色反应15~30 min后取200 μL反应液至另一24孔板中，加入9倍体积的无水乙醇混合均匀，用紫外-可见分光光度计测其在510 nm波长下进行分析。

2.根据权利要求1所述的一种β-羟基羧酸酯羟基氧化酶的高通量筛选方法，其特征在于显色剂A为FeCl₃、FeCl₂、Fe₂(SO₄)₃、FeSO₄、Fe(ClO₄)₃、CoCl₂或ZnCl₂中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种β-羟基羧酸酯羟基氧化酶的高通量筛选方法，其特征在于显色剂B为HCl。

4.根据权利要求1所述的一种β-羟基羧酸酯羟基氧化酶的高通量筛选方法，其特征在于显色剂B为H₂SO₄。

5.根据权利要求1所述的一种β-羟基羧酸酯羟基氧化酶的高通量筛选方法，其特征在于显色剂B为HClO₄。