[发明专利]人血管钠肽与人血清蛋白的融合蛋白及其制备

权利要求书

1.一种人血管钠肽与人血清白蛋白的融合蛋白，其特征在于：包括第一区和第二区，所述第一区与人血管钠肽至少85％序列同源，所述第二区与人血清白蛋白至少85％序列同源或为人血清白蛋白的部分氨基酸序列；所述第一区位于融合蛋白的N末端，所述第二区位于融合蛋白的C末端，中间不加任何连接肽；或所述第二区位于融合蛋白的N末端，所述第一区位于融合蛋白的C末端，中间不加任何连接肽。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述第一区与人血管钠肽至少95％序列同源，所述第二区与人血清白蛋白至少95％序列同源。

3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述人血清白蛋白的部分氨基酸序列为人血清白蛋白部分结构域或经结构域重排后的人血清白蛋白。

4.一种人血管钠肽与人血清白蛋白的融合蛋白，其特征在于：包括第一区和第二区，所述第一区与人血管钠肽氨基酸残基序列相同或为其功能等同物，所述第二区与人血清白蛋白氨基酸残基序列相同或为其功能等同物；所述第一区位于融合蛋白的N末端，所述第二区位于融合蛋白的C末端，中间不加任何连接肽；或所述第二区位于融合蛋白的N末端，所述第一区位于融合蛋白的C末端，中间不加任何连接肽。

5.一种人血管钠肽与人血清白蛋白的融合蛋白的制备方法，包括步骤：

1)人工合成人血管钠肽hVNP cDNA；

2)通过PCR从人胎肝cDNA文库中扩增获得HSA cDNA；

3)利用重叠PCR技术，连接hVNP cDNA和HSA cDNA，中间不加入任何连接肽，得到的hVNP-HSA cDNA融合基因；

4)将hVNP-HSA cDNA融合基因通过表达载体整合到宿主细胞的染色体中，在宿主细胞中进行表达。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述的宿主细胞为酵母。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述的宿主细胞为毕赤酵母。

8.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤4)中所述表达载体为pPIC9、pPIC9K、pHIL-S1、pPICZα、pYAM75P6、pPIC3K、pPICZ、pHWO10、pGAPZ或pGAPZα。

9.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤4)中所述的宿主细胞为GS115，所述表达载体为毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K。

10.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于：步骤4)中所述整合到宿主细胞的染色体中的方法为转化锂盐法、PEG法、原生质体法或电穿孔法。