[发明专利]一种中药组方的质量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药组方，具体的说，涉及一种中药组方的质量检测分析方法。

背景技术

本发明涉及的中药组方系解放军第302医院协定处方，现用名称为复方败毒汤，是由炙黄芪50～70g；土茯苓45～65g；地耳草55～75g；连翘40～60g；红景天5～20g组成，其中黄芪是豆科多年生草本蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根；土茯苓是百合科多年生攀援藤本光叶菝葜的干燥根茎；地耳草为金丝桃科一年生草本地耳草的干燥全草；连翘为木犀科落叶灌木连翘的干燥果实；红景天为景天科多年生草本红景天或宽果红景天等的干燥根茎。主要药效成分是连翘、土茯苓等，具有健脾益肾，疏肝活血，清热利湿的功效，可提高机体免疫力，抑制乙肝病毒复制，改善肝功能。该方在临床应用量较大，但由于质量控制研究较为薄弱，有必要对其主要有效成分进行含量检测和控制，为提高和保障该方药临床疗效提供依据，服务临床广大患者。高效液相色谱(HPLC)技术以其分离度高、灵敏快速、通用性强的优势常用于中药材的质量控制。

但是针对复方败毒汤来说，如果采用常用的HPLC技术，发现完全无法将复方中的各复杂成分的色谱峰分离，即使不断优化色谱分离条件，如将测定时间从常规的30min延长至90min，仍然不能获得满意的色谱峰分离度，故而需要找到其他的合适的分析方法，以达到既能同时测定复方败毒汤中各主要药效成分的技术目的，还可以达到测定快速、高速、高灵敏度且测定方法简单易行的技术效果。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的技术方案是：一种复方败毒汤的质量检测方法，其是采用超高速液相色谱法在275nm处同时测定复方败毒汤中落新妇苷、连翘酯苷A和连翘苷的含量。

本申请发现，采用UPLC测定复方败毒汤的各成分，对其中的落新妇苷、连翘酯苷A和连翘苷等成分具有超高分离度、超高速度、超高灵敏度等优点；可以一次进样就得到较好的色谱峰分离度，无需复杂的样品前处理过程，大大提高了色谱的分离度和分析速度，有效节约了分析时间，实现快速、高分辨的复方败毒汤中药质量分析，对于临床质量控制具有良好的效果。

本发明的质量检测方法，其中最优的色谱条件为：

100mm×2.1mm，1.7μm的Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱；

流动相为乙腈(A)-0.1％醋酸(B)梯度洗脱：0～8min，2％～4％A；8～10min，4％～10％A；10～11min，10％～11％A；11～12min，11％～13％A；12～23min，13％～15％A；23～30min，15％～20％A；30～35min，20％～25％A；

检测波长275nm；流速为0.3mL/min；柱温35℃；进样量3μL。

采用此色谱条件可以得到最佳的分析结果；申请人发现，如果采用常规的UPLC流动相如以甲醇-水为流动相基线漂移较大，而以乙腈-水为流动相峰形较差，申请人经多次试验和经验后改用乙腈-0.1％醋酸为流动相峰形得到明显的改善，采用等梯度洗脱，目标成分和其它成分也不能很好分离，再调节流动相比例采用梯度洗脱，获得较好分离度，峰形较理想，基线较稳定。

申请人在200nm-400nm波长范围内进行3D全波长扫描，发现在275nm处各指标成分有最大吸收，可以在同一波长下同时检测落新妇苷、连翘酯苷A和连翘苷3个目标成分。这样又可以大为节约分析时间，节省时间成本。

同时本发明的质量检测方法，还具有样品处理过程简单易行的技术效果，所述复方败毒汤在进样检测前，精密吸取复方败毒汤2ml置10ml蒸发皿中，水浴蒸干，将得到的干浸膏用甲醇溶解，置2ml量瓶中，稀释并定容至刻度，然后过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，为进样样品，备用。相比其余的检测方法来说，中药复方的成分复杂，要想检测其中的某些特定成分，必须经过复杂的样品前处理过程，去除基质干扰等因素；而本发明的方法完全不需要这一过程，只需做简单的提取过程即可。

采用本发明的质量检测方法，可以快速检测出复方败毒汤中的各主要药效成分的含量，对于其临床使用时的质量控制至关重要；如果其中的药效成分含量远低于标准含量，则其复方质量堪忧。所述复方败毒汤中落新妇苷、连翘酯苷A和连翘苷的含量应分别大于等于18μg/mL、23μg/mL和11μg/mL。

最后本发明的复方败毒汤中的连翘和土茯苓为中医临床常用中药，UPLC同时测定复方败毒汤中落新妇苷、连翘酯苷A和连翘苷的含量方法的建立也可以为其它含有连翘、土茯苓的复方质量控制提供参考依据。

本发明专利的有益效果归纳为：