[发明专利]用于rs8099917单核苷酸多态性的直接荧光PCR检测试剂盒及应用

权利要求书

1.一种用于rs8099917单核苷酸多态性的直接荧光PCR检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括检测PCR试剂、阳性对照PCR试剂和阴性对照PCR试剂，所述检测PCR试剂包括单核苷酸多态性rs8099917位点的特异性引物1和引物2、探针1和PCR Mixture1；所述阳性对照PCR试剂包括阳性质控品、引物3、引物4、TaqMan探针2和PCR Mixture2，所述阳性质控品为rs8099917位点野生型和突变型质粒混合液；所述阴性对照PCR试剂包括阴性质控品、引物5、引物6、TaqMan探针3和PCR Mixture3，所述阴性质控品为rs8099917位点野生型质粒溶液；所述PCR Mixture1包括PCR缓冲液、dNTPs、BSA、MgCl₂、Taq 22B DNA聚合酶和双蒸水，所述PCR Mixture2和PCR Mixture3的组成同PCR Mixture1；

引物1、引物3和引物5均为：5’-ACATACAACATGGAGAGTTAAAG-3'；

引物2和引物6均为：5’-TGGTTCCAATTTGGGTGgC-3'；

引物4为：5’-TGGTTCCAATTTGGGTGgA-3'；

TaqMan探针1、TaqMan探针2和TaqMan探针3均为：

5’-FAM-AAGTCTTGTATTTCACCTCCTGGAGG-BHQl-3’；

野生型质粒的序列为：

GTTCCTTGTAAAAGATTCCATCCATACAAAAACATACAACATGGAGAGTTAAAGTAAGTCTTGTATTTCACCTCCTGGAGGTAAATATTTTTTAACAATT

TGTCACTGTTCCTCCTTTTGTTTTCCTTTCTGTGAGCAATTTCACCCAAATTGGAACCATGCTGTATACAGTTTGGTAGCTGGCTTTTTATGTCTTACCATTATCTCTCATTTGCATTCTCCCACATCTTTAATTATAGCGTATCAGTTAGGGCCCAGCAGGAAACAGATGGCCCGTCAATTTAGGATAAT

TTGAGGTGGGGTTGATACCAGAAGCCTTTA；

突变型质粒的序列为：

GTTCCTTGTAAAAGATTCCATCCATACAAAAACATACAACATGGAGAGTTAAAGTAAGTCTTGTATTTCACCTCCTGGAGGTAAATATTTTTTAACAATT TGTCACTGTT

CCTCCTTTTGTTTTCCTTTCTGTGAGCAATG

TCACCCAAATTGGAACCATGCTGTATACAGTTTGGTAGCTGGCTTTTTATGTCTTACCATTATCTCTCATTTGCATTCTCCCACATCTTTAATTATAGCGTATCAGTTAGGGCCCAGCAGGAAACAGATGGCCCGTCAATTTAGGATAATTTGAGGTGGGGTTGATACCAGAAGCCTTTA。

2.如权利要求1所述试剂盒，其特征在于所述PCR Mixture 1组成为：Taq22B 1.5μL，dNTPs 2μL，Mg²⁺2μL，BSA 1μL，PCR缓冲液2.5μL，双蒸水12.6μL～4.6μL。

3.如权利要求1所述试剂盒，其特征在于所述检测PCR试剂的组成为：

PCR Mixture 1为21.6μL～13.6μL，引物1为0.5μL、引物2为0.5μL、TaqMan探针1为0.4μL，双蒸水补足至25μL；所述PCR Mixture 1组成为：Taq22B 1.5μL，dNTPs 2μL，Mg²⁺2μL，BSA 1μL，PCR缓冲液2.5μL，双蒸水12.6μL～4.6μL。

4.如权利要求1所述试剂盒，其特征在于所述阳性对照PCR试剂的组成为：PCR Mixture2为21.6μL～13.6μL，引物3为0.5μL、引物4为0.5μL、TaqMan探针2为0.4μL，阳性质控品2μL～10μL，双蒸水补足至25μL；所述PCR Mixture 2组成为：Taq22B 1.5μL，dNTPs 2μL，Mg²⁺2μL，BSA 1μL，PCR缓冲液2.5μL，双蒸水12.6μL～4.6μL。