[发明专利]一种海葵多糖的制备方法及其抗肿瘤应用

权利要求书

1.一种海葵多糖的制备方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

(1)将新鲜海葵外表清洗干净，剪开，洗去其腔肠内含物质后剪碎，所得碎海葵经匀浆剪切10-20min，所得匀浆液中加入体积为匀浆液体积4-10倍的水，所得混合液在30-70℃浸提2-4h，所得提取液离心，取上清液A浓缩至原体积的1/4，得到浓缩液A，

(2)浓缩液A中加入体积分数95％乙醇，使所得醇提混合液I中乙醇的体积分数为30％，4℃环境中放置4-8h，离心、分离得到沉淀I和上清液I，向上清液I中加入体积分数95％乙醇，使所得醇提混合液II中乙醇的体积分数为60％，4℃环境中放置4-8h，离心、分离得到沉淀II和上清液II，向上清液II中加入体积分数95％乙醇，使所得醇提混合液III中乙醇的体积分数为80％，4℃环境中放置4-8h，离心、分离得到沉淀III；

(3)将沉淀I、II和III分别溶于水，加木瓜蛋白酶，在pH5-6、温度30-70℃条件下酶解1-4h，所述木瓜蛋白酶的质量用量为沉淀I、II或III重量的0.1-1％，酶解完成后煮沸灭酶，分别得到酶解液I、酶解II、酶解液III；

(4)(4a)向酶解液I中加入其体积三分之一的Sevag试剂，所述Sevag试剂是将正丁醇和氯仿按体积比1:4混合制成，搅拌30～60min，离心除去析出的变性蛋白，取上清液B按照上述步骤重复操作3-5次，最后得到的上清液C减压浓缩，得浓缩液C，真空冷冻干燥制得海葵多糖I；

(4b)酶解液II、III按照上述步骤(4a)进行同样操作，分别制得海葵多糖II和海葵多糖III。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述海葵为星虫爱氏海葵。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述离心是在4℃下、8000-10000rpm、离心5-15min。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，水的体积用量以沉淀I、II或II的质量计为10～20mL/g。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，木瓜蛋白酶活力为3000U。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，酶解的条件为pH5.5、温度50～65℃条件下酶解2-4h。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，酶解的条件为pH5.5、温度65℃条件下酶解4h。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，所述木瓜蛋白酶的质量用量为沉淀I、II或III重量的0.5～1％。

9.如权利要求1～8之一所述的方法制得的海葵多糖I、海葵多糖II或海葵多糖III。

10.如权利要求9所述的海葵多糖I、海葵多糖II或海葵多糖III在制备抗肺癌、抗前列腺癌或抗腹水瘤药物中的应用。