[发明专利]转化生长因子β1激动剂多肽及其制备方法、应用

说明书

技术领域：

本发明涉及药物领域，具体涉及用于预防或治疗脑梗塞的多肽化合物。

背景技术：

脑梗塞是指突然发生的脑局部血液循环障碍导致脑组织缺血缺氧引起的局灶性神经功能缺损综合征。世界范围内三大死亡疾病之一，也是成年人首位致残原因。由于目前脑梗塞的病因及发病机制尚未完全阐明，且临床上理想的治疗手段有限，使得其不仅发病率很高，致死率、致残率及复发率也较高，给个人和社会造成了巨大的负担。

目前预防或治疗脑梗塞的药物，主要为针对控制易患因素。如患者凝血高，给予抗血栓的治疗；如患有糖尿病、应及时控制血糖，包括饮食控制；如有高血压则应给降压药，使血压降至适当水平，如有血胆固醇增高，则应控制高胆固醇适当给予降脂药物。

转化生长因子-β1(transforming growth factor-pi,TGF-β1)是具有潜在抗炎特性的多功能细胞因子，目前发现其可通过多种途径参与脑缺血后损伤与修复的病理生理过程。有研究称其可通过增加TGF-β1蛋白的表达，提高血浆中TGF-β1的含量，进而在疾病的发生发展中起到预防或治疗脑梗塞的作用。然而，现阶段，没有成熟开发的转化生长因子-β1激动剂问世，用于预防或治疗脑梗塞。

发明内容：

本发明目的是针对现有预防或治疗脑梗塞药物的特点，设计一种多肽化合物，能有效治疗或预防脑梗塞。

技术方案

转化生长因子-β1激动剂多肽2，其特征在于：其序列为CAELYIDFRKDLGWKWIHEP。采用Fmoc保护的固相合成技术制备，Fmoc-Gly-Wang树脂作为载体，6-氯-1-羟基苯并三氮唑为缩合剂，三氟乙酸为切割试剂。可共价连接一个佐剂，佐剂是牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。转化生长因子-β1激动剂多肽2在预防或治疗脑梗塞中的应用。可通过多种给药方式预防或治疗脑梗塞，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。

有益结果：

本发明中的转化生长因子-β1激动剂多肽2可以靶向促进转化生长因子-β1表达，提高血浆中转化生长因子-β1的含量，达到预防或治疗脑梗塞的作用。

具体实施方式

实施例1

多肽的化学合成方法

多肽2用Fmoc保护的固相合成技术制备。合成反应按照抑制剂1序列从C端向N端进行，Fmoc-Gly-Wang树脂作为载体，(可在Advanced Chem Tech公司购得)上有自由氨基。每一步连接过程中，氨基酸残基都要活化，活化混合物中有4倍于载体上自由氨基的HBTU，HOBt，DIEA和Fmoc-氨基酸。用6-氯-1-羟基苯并三氮唑为缩合剂，进行连接反应，每次氨基酸的连接反应之后，用吡啶/醋酸/N-甲基咪唑(4:2:0.5)的混合物来封闭未连接的自由氨基，封闭反应10分钟。下一个氨基酸连接之前，都要把载体上的Fmoc-基团去掉，去Fmoc-基团使用含20％哌啶的二甲基甲酰胺，需15分钟。最后，当所有氨基酸残基顺序连接之后，抑制剂1用97％三氟乙酸从载体上切割下来，切割在室温下进行2小时。

应用上述化学条件可合成并获得多肽2，序列为CAELYIDFRKDLGWKWIHEP，该序列为全新序列。也可委托上海生工合成。

实施例2

转化生长因子-β1激动剂多肽2预防大鼠脑梗塞模型的作用

雄性8周龄的SD大鼠40只，随机分为4组，分别为：A组为空白对照组：生理盐水；B组为模型对照组：造模+生理盐水；C组为药物干预组：造模+转化生长因子-β1激动剂多肽2(4mg/kg/d)；D为阳性药干预组：造模+尿激酶(10mg/kg)。连续10天。建立MCAO的模型。(1)观察大鼠局部脑缺血再灌注后梗死体积的大小；(2)采用神经行为学评分，观察MCAO动物的康复情况；(3)检测血浆中转化生长因子-β1的含量。

结果：预防性给予多肽2组的脑梗塞模型大鼠与模型组相比，脑梗塞面积减少(P<0.01)，神经行为学评分降低(P<0.01)，血浆中TGF-β1的含量升高(P<0.01)，与模型对照组比较差异均有统计学意义(见表1)。

表1转化生长因子-β1激动剂多肽2对预防大鼠脑梗塞模型的作用

*p<0.05，**p<0.01与模型组相比

结论：转化生长因子-β1激动剂多肽2对大鼠脑梗塞具有预防作用。

实施例3

转化生长因子-β1激动剂多肽2治疗大鼠脑梗塞模型的作用