[发明专利]链霉菌菌株及其防治番茄枯萎病联合应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，涉及两株生防放线菌—龟裂链霉菌M527和球孢链霉菌M927代谢产物在防治番茄枯萎病中的应用。 

技术背景

番茄(Lycopersicon esculentum Mill)是一种世界性的蔬菜作物，也是我国的主栽蔬菜之一。番茄枯萎病是番茄的主要病害之一，该病害传染性强，严重影响了番茄的产量和品质。 

番茄枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌专化型Fusarium oxysporum f. sp. Lycopersici Snyder et Hansen，番茄枯萎病菌的专化性极强，只危害番茄。病源为半知菌亚门、镰孢属的番茄萎蔫病菌。病菌在土壤中越冬，笠年随雨水、灌溉水及土壤传播。病原菌从幼根或伤口浸入，在植株维管柬中扩展蔓延，堵塞导管，并产生有毒的番茄凋萎素，随输导组织扩展，致使维管束变褐、失去输导功能，从而引起植株枯萎。针对番茄枯萎病害目前主要采用化学农药杀灭病原菌，这些药剂的大量长期使用不仅使得番茄植株产生抗药性，农药残留也会影响番茄的品质，给农产品安全带来隐患。因此，生物防治引起人们的重视。目前有研究表明植物提取物中的活性成分对有一定的抑制作用，但植物有效成分提取操作步骤多，效率低；目前的研究主要集中在利用微生物的代谢产物防治番茄枯萎病菌，其中铜绿假单胞菌、镰刀菌作为拮抗微生物具有潜在的致病性，分离筛选芽孢杆菌虽有广泛报道，但菌株本身稳定性差，防治效果并不显著。放线菌因其易产生抗病原菌成分等活性物质，已成为生物防治植物病虫害的主要资源和生物农药开发的主要来源。土壤是放线菌栖居的重要场所，从土壤中获得具有高效抗菌活性的放线菌是目前世界范围内研制开发新医药和新农药必不可少的基础工作，但从土壤中筛选拮抗放线菌对番茄枯萎病原菌的生物防治报道还并不多见。 

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于通过筛选提供对番茄枯萎病原菌具有较强拮抗作用的两株生防菌—菌龟裂链霉菌M527和球孢链霉菌M927。 

本发明的第二个目的是通过不同的比例混合两株生防链霉菌的发酵产物，提供上述菌龟裂链霉菌和球孢链霉菌在番茄枯萎病防治中的联合应用。 

本发明的目的是通过以下技术手段得以实现： 

本发明首先以在山东省泰安市郊区盐碱地采集的土样为研究对象，经分离、发酵培养、发酵液提取以及对植物病原真菌抑制活性检测等步骤获得两株对番茄枯萎病原菌具有较强抑菌活性的链霉菌；其中一株经微生物分类学鉴定并命名为龟裂链霉菌（Streptomyces rimosus）M527。该菌已于2013年6月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO: M 2013270；另一株经微生物分类学鉴定并命名为球孢链霉菌（Streptomyces globisporus）M927，该菌已于2013年12月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M 2013709。中国典型培养物保藏中心地址：武汉市武昌珞珈山，邮编：430072。

本发明所述的龟裂链霉菌（Streptomyces rimosus）M527在PDA固体培养基上培养时气丝白色至灰色，基丝乳脂色。显微观察发现Streptomyces rimosus M527孢子丝初旋至螺旋形。孢子长圆形至柱形，表面光滑。本发明所述的Streptomyces rimosus M527，发酵液经提取浓缩后可对番茄枯萎病病原真菌具有较强的抑制作用。 

本发明所述的球孢链霉菌（Streptomyces globisporus）M927在PDA固体培养基上培养时气丝暗秸草色，基丝无色。显微观察发现Streptomyces globisporusM927孢子丝长枝条状，孢子卵圆形，表面光滑。本发明所述的Streptomyces globisporus M927，发酵液经提取浓缩后可对番茄枯萎病病原真菌具有较强的抑制作用。 

所述的番茄枯萎病原菌拮抗放线菌的筛选和抑菌活性检测过程如下所述： 

(1) 从野外（山东省泰安市郊区盐碱地）采集土样，并进行晾干处理；

(2) 从土样中分离放线菌，并利用番茄枯萎病原菌作为指示菌筛选具有拮抗作用的放线菌；