[发明专利]一种蒙药蓝盆花的指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种蒙药蓝盆花的指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱。

背景技术

近年来国际植物药市场需求量不断增长，我国植物药资源面临着药材原料严重缺乏的现状。中蒙药原料药材由于受基源、产地环境气候、采收时间、加工方法等一系列过程的影响，所含成分也往往相差很大，质量真实性、均一性、稳定性很难保障。同时在巨额利润的诱惑下，不少药商不顾消费者的生命安全，以假充真，以次充好。中蒙药质量问题成为中蒙药国际化的一个技术瓶颈。目前中蒙药的质量控制主要以已知的一种或几种活性成分或指标成分为控制质量的指标，通过定性和定量的分析，判断药品的真伪优劣。但是中蒙药的疗效既不是任何单一活性成分的作用，也不是多种成分活性的简单相加。所以，宏观地综合分析已成为中蒙药质量控制发展的必然趋势，现阶段色谱指纹图谱就是适应这一特点的质量控制模式，能够比较全面地、综合地反映药材中所含化学成分。

目前，蒙药蓝盆花药材及其复方制剂尚缺乏科学、可控的质量标准。仅在《中华本草》(蒙药卷)及《中华人民共和国卫生部药品标准》(蒙药分册)中有蓝盆花药材的显微鉴别和理化鉴别，无薄层鉴别项和含量测定项。简单的质量控制方法致使该药材的使用、生产和流通都受到限制，临床用药的有效性和安全性没有保证。目前本课题组和国内相关课题组对蓝盆花的质量控制方面进行了相关的研究，建立了药材中总黄酮的含量测定方法及单一成分的含量测定方法。无论是法定的现行标准还是目前已有的标准研究，都未能从整体的角度全面综合地反映蓝盆花药材的化学内涵和质量。

本发明利用高效液相色谱法构建了蒙药蓝盆花的色谱指纹图谱分析方法，并通过多批次药材的分析确定了该药材的标准指纹图谱。此方法简单方便、快速有效，可用于从宏观角度全面评价蒙药蓝盆花药材的质量。

发明内容

本发明的目的在于克服上述蓝盆花药材质量评价的现有技术缺陷，提供一种蒙药蓝盆花的指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱，用于宏观评价蓝盆花药材质量的真实性、优良性和稳定性。该发明方法简单方便、快速有效，可用于从宏观角度全面评价蒙药蓝盆花药材的质量，对于提高蓝盆花药材及其成方制剂质量，促进该药材及其制剂的现代研究和深层次开发利用具有重要意义。其具体技术方案为：

在蒙药蓝盆花现有药效物质基础研究结果的基础上利用高效液相色谱法构建蒙药蓝盆花的色谱指纹图谱分析方法，并结合多批次蓝盆花药材的指纹图谱分析，确定该药材的标准指纹图谱。本方法的特点：简便、稳定、精密度高、重现性好，可全面、客观、有效反映蒙药蓝盆花药材的质量。

一种蒙药蓝盆花的指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

(a)供试品溶液的制备：称取蓝盆花干燥粉末约1.0g，精密称定，置于100mL具塞三角瓶中，分别精密加入60％～100％的乙醇或60％～100％甲醇溶液20～50mL，摇匀，密塞，超声提取30～60min或回流提取30～60min，提取1～3次，合并滤液。减压回收溶剂至干，用20％的甲醇转移至25mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，精密吸取2mL置5mL量瓶中，以20％甲醇稀释到刻度，摇匀，再精密吸取0.5mL加入预处理后的固相萃取柱，控制流速使样品溶液缓慢通过固相萃取柱，加5％～20％甲醇0.5～2.0mL洗脱，控制流速，弃去洗脱液，加70％～100％甲醇2mL洗脱，收集洗脱液，微孔滤膜(0.45μm)滤过，备用。

(b)对照品溶液的配制：分别取下列五种对照品适量，均制成0.1mg/mL样品溶液，微孔滤膜(0.45μm)滤过，备用。

1.木犀草素-6-C葡萄糖苷

2.华北蓝盆花素

3.芹菜素7-O-芦丁糖苷

4.芹菜素-7-O-葡萄糖苷

5.木犀草素-7-O-葡萄糖苷

(c)色谱条件：色谱柱：各种反相C₁₈柱；流动相：甲醇-水、甲醇-水-磷酸、乙腈-水、乙腈-水-磷酸；洗脱梯度：10％B(0min)～100％B(95min)；检测波长：220～400nm；柱温：25～35℃；流速：0.6～1.0mL/min；进样量：10μL。

(d)标准指纹图谱：以10号药材指纹图谱作为蓝盆花药材的标准指纹图谱(如图1)。

该标准指纹图谱中包含共有指纹峰15个，以10号峰为对照，其相对保留时间和相对峰面积为1，其它指纹峰的相对保留时间和相对峰面积见表1。

表1  蓝盆花标准指纹图谱中共有指纹峰的保留时间和峰面积

该标准指纹图谱中，5个指纹峰的结构可以确定。