[发明专利]链霉菌菌株及其防治油菜菌核病联合应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，涉及两株生防放线菌—龟裂链霉菌M527和金色链霉菌M930代谢产物在防治油菜菌核病中的应用。

技术背景

油菜，原产我国，南北均有种植。油菜为低脂肪蔬菜，且含有膳食纤维，因此具有较高的营养价值和药效功能。油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary）引起的油菜菌核病是世界范围内的一种病害，在我国居油菜3大病害之首，菌核病主要危害茎秆，引起植株早枯，角果减少，种子皱瘪，千粒重和出油率降低，产量下降，是影响油菜产量和品质的主要因素之一。该病在我国长江中下游油菜主产区发生尤为严重，常年株发病率高达10%—30%。目前主要采用的防治措施以喷施化学农药苯丙咪唑类或二甲酰亚胺等化学防治方式为主，这些化学药剂的长期使用导致了环境污染、人畜中毒等问题，引起了人们的普遍关注。因此，生物防治引起人们的重视。在天然产物中, 植物源农药的研究与开发最为人们所关注目前有研究表明植物提取物中的活性成分对有一定的抑制作用，但植物有效成分提取操作步骤多，效率低，但未见应用于实际生产；放线菌因其易产生抗病原菌成分等活性物质，已成为生物防治植物病虫害的主要资源和生物农药开发的主要来源。国内外在生物防治油菜菌核病方面已报道有抑制作用的大多为真菌和细菌，如木霉、荧光假单胞菌和芽孢杆菌，从土壤中筛选拮抗放线菌对油菜菌核病原菌的生物防治报道还并不多见。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于通过筛选提供对油菜菌核病原菌具有较强拮抗作用的两株生防菌—菌龟裂链霉菌M527和金色链霉菌M930。

本发明的第二个目的是通过不同的比例混合两株生防链霉菌的发酵产物，提供上述菌龟裂链霉菌和金色链霉菌在油菜菌核病防治中的联合应用。

本发明的目的是通过以下技术手段得以实现：

本发明首先以在山东省泰安市郊区盐碱地采集的土样为研究对象，经分离、发酵培养、发酵液提取以及对植物病原真菌抑制活性检测等步骤获得两株对油菜菌核病原菌具有较强抑菌活性的链霉菌；其中一株经微生物分类学鉴定并命名为龟裂链霉菌（Streptomyces rimosus）M527。该菌已于2013年6月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO: M 2013270；另一株经微生物分类学鉴定并命名为金色链霉菌（Streptomyces aureofaciens）M930，该菌已于2013年12月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M 2013711。中国典型培养物保藏中心地址：武汉市武昌珞珈山，邮编：430072。

本发明所述的龟裂链霉菌（Streptomyces rimosus）M527在PDA固体培养基上培养时气丝白色至灰色，基丝乳脂色。显微观察发现Streptomyces rimosus M527孢子丝初旋至螺旋形。孢子长圆形至柱形，表面光滑。本发明所述的Streptomyces rimosus M527，发酵液经提取浓缩后可对油菜菌核病病原真菌具有较强的抑制作用。

本发明所述的金色链霉菌（Streptomyces aureofaciens）M930在PDA固体培养基上培养时气丝白色，基丝褐色。显微观察发现Streptomyces aureofaciensM930孢子丝紧密螺旋形，孢子卵圆形，表面光滑。本发明所述的Streptomyces aureofaciens M930，发酵液经提取浓缩后可对油菜菌核病病原真菌具有较强的抑制作用。

所述的油菜菌核病原菌拮抗放线菌的筛选和抑菌活性检测过程如下所述：

(1) 从野外（山东省泰安市郊区盐碱地）采集土样，并进行晾干处理；

(2) 从土样中分离放线菌，并利用油菜菌核病原菌作为指示菌筛选具有拮抗作用的放线菌；

(3) 将长出的放线菌分别点种于混有油菜菌核病原菌孢子悬液（1×10⁶ cfu·mL^-1）的PDA平板上，通过观察抑菌圈大小，挑选抑菌圈较明显的菌株进入复筛；

(4) 将选取的菌株进行发酵培养，发酵结束后离心收集发酵液，用乙酸乙酯萃取，真空减压浓缩后制备浸膏，用于油菜菌核病的防效检测，由此筛选出防治效果较好的两株拮抗微生物—龟裂链霉菌M527和金色链霉菌M930。

本发明的有益效果：