[发明专利]链霉菌菌株及其防治黄瓜枯萎病联合应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，涉及两株生防放线菌—白色链霉菌2013和暗黑链霉菌M929代谢产物在防治黄瓜枯萎病中的应用。

技术背景

黄瓜枯萎病，又名萎蔫病、死秧病，是黄瓜病害中最为严重、造成经济损失最大的病害之一。近年来黄瓜枯萎病的发生逐年加重，一般可导致黄瓜产量减少10%~20%，病情严重时损失达70%以上，给生产造成巨大损失。

黄瓜枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌黄瓜专化型Fusarium oxysporum f. sp. Cucumerinum，该病菌在土壤、病株残体及未腐熟的农家肥中或附着在种子上越冬，成为翌年初侵染源。病原菌从根部伤口和根毛生长点侵入植株，进而破坏其根、茎和叶的维管束，使黄瓜植株吸收和运输水分功能丧失，最终造成黄瓜植株枯萎死亡。针对黄瓜枯萎病害目前主要采用化学农药杀灭病原菌，但化学防治导致农药残留、环境污染及抗药性等一系列问题。因此，生物防治引起人们的重视。目前有研究表明植物提取物中的活性成分对有一定的抑制作用，但植物有效成分提取操作步骤多，效率低（贾俊英，中国农学通报，2014；郑成锐，中国园艺文摘，2011；李杰，科技导报，2014）；已报道采用芽孢杆菌作为生防菌防治黄瓜枯萎病病害的发生，由于该菌株对病原菌的抑制作用不强，故生防效果并不理想（韦巧婕，南京农业大学学报，2013；卜春亚，中国农学通报，2013）。放线菌因其易产生抗病原菌成分等活性物质，已成为生物防治植物病虫害的主要资源和生物农药开发的主要来源。土壤是放线菌栖居的重要场所，从土壤中获得具有高效抗菌活性的放线菌是目前世界范围内研制开发新医药和新农药必不可少的基础工作。从土壤中筛选拮抗放线菌对黄瓜枯萎病原菌的生物防治已有不少报道，但大多集中在用单一拮抗放线菌的发酵产物防治黄瓜枯萎病，治疗和预防效果并不显著。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于通过筛选提供对黄瓜枯萎病原菌具有较强拮抗作用的两株生防菌—白色链霉菌2013和暗黑链霉菌M929。

本发明的第二个目的是通过不同的比例混合两株生防链霉菌的发酵产物，提供上述白色链霉菌和暗黑链霉菌在黄瓜枯萎病防治中的联合应用。

本发明的目的是通过以下技术手段得以实现：

本发明首先以在浙江西溪湿地植物根际采集的土样为研究对象，经分离、发酵培养、发酵液提取以及对植物病原真菌抑制活性检测等步骤获得两株对黄瓜枯萎病原菌具有较强抑菌活性的链霉菌；其中一株经微生物分类学鉴定并命名为白色链霉菌（Streptomyces albus）2013。该菌已于2013年6月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO: M 2013269；另一株经微生物分类学鉴定并命名为暗黑链霉菌（Streptomyces tenebrarius）M929，该菌已于2013年12月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M 2013710。中国典型培养物保藏中心地址：武汉市武昌珞珈山，邮编：430072。

本发明所述的白色链霉菌（Streptomyces albus）2013在PDA固体培养基上培养时气丝白色，基丝地衣状，乳脂色。显微观察发现Streptomyces albus 2013孢子丝螺旋形，孢子球形至卵圆形，表面光滑。本发明所述的Streptomyces albus 2013，发酵液经提取浓缩后可对黄瓜枯萎病病原真菌具有较强的抑制作用。

本发明所述的暗黑链霉菌（Streptomyces tenebrarius）M929在PDA固体培养基上培养时气丝暗鼠灰色，基丝地衣状，黑色。显微观察发现Streptomyces tenebrarius M929孢子丝敞圈， 孢子球形至卵圆形，表面光滑。本发明所述的Streptomyces tenebrarius M929，发酵液经提取浓缩后可对黄瓜枯萎病病原真菌具有较强的抑制作用。

所述的黄瓜枯萎病原菌拮抗放线菌的筛选和抑菌活性检测过程如下所述：

(1) 从野外（浙江省西溪湿地植物根际）采集土样，并进行晾干处理；

(2) 从土样中分离放线菌，并利用黄瓜枯萎病原菌作为指示菌筛选具有拮抗作用的放线菌；