[发明专利]一种环介导等温扩增引物在制备检测牛边缘无浆体病原的试剂中的用途

权利要求书

1.一种环介导等温扩增引物在制备检测牛边缘无浆体病原的试剂中的用途，其特征在于，

特异性LAMP引物根据Msp5基因设计3对引物：外，内，环引物，正向外引物命名为Msp5-F3b，反向外引物命名为Msp5-B3b，正向内引物命名为Msp5-FIPb，反向内引物命名为Msp5-BIPb，为了加速反应设计环路引物，其中包括正向环引物Msp5-LFb和反向环引物Msp5-LBb，三对的外引物用于PCR检测；

Msp5-F3b ACCTTCTGCTGTTCGTTG

Msp5-B3b GAGAAGCCATGCCTAACTC

Msp5-FIPb GTTGAAAGACGCGGAGGCTAAATCGGCGA

(F1c+F2) GAGGTTTAC

Msp5-BIPb CCGTCAGTAGCGGCGATTTGTACTTACAGG

(B1c+B2) CTGAGAAGC

Msp5-LFb TGCCCTCACTTACAACTTCG

Msp5-LBb CGGCAAGCACATGTTGGTA。

2.根据权利要求1所述的环介导等温扩增引物在制备检测牛边缘无浆体病原的试剂中的用途，其特征在于，采用以下步骤完成：

LAMP反应体系是25μL，包括0.4μM外引物，1.6μM内引物，0.8μM环引物，1μLDNA样品，硫酸镁1mM dNTP Mix 1mm，1mm甜菜碱，2.5μL10×Thermopol bufferlU的Bst DNA聚合酶，加ddH₂0共25μL；混匀后，加入20μL油混匀并离心；在PCR管的中下部加入0.5μL SYBR GREEN I染料然后轻轻盖上，以防止SYBR GREEN I染料降入管底；将混合物在63℃下恒温反应20分钟；反应后，在光亮视野下观察到混合物与SYBR GREEN I染料在PCR管中的颜色变化，并在紫外线照射下365nm处也可观察到；之后LAMP产物3μL用0.8％琼脂糖凝胶电泳分析。