[发明专利]一种采用卵生型手段繁育幼生型牡蛎的方法

说明书

技术领域：

本发明属于海洋农业中贝类遗传繁育技术领域，具体涉及一种采用卵生型手段繁育幼生型牡蛎的方法。

背景技术：

牡蛎属于软体动物门，双壳纲，珍珠贝目，牡蛎科，是一种重要的海洋生物资源，其肉味鲜美、富含多种人体必需氨基酸。为世界最重要的海水养殖经济种类之一，其养殖的总产量和单位面积产量在所有的贝类养殖品种中位居首位(张跃环，2012)。我国是牡蛎养殖大国，2010-2012年产量在350-380万吨之间；它占养殖贝类产量的35％，海水养殖总产量的25％，世界产量的70％以上(中国渔业年鉴2013)。

在我国，牡蛎科至少包括5个属，分别为巨蛎属(Crassostrea)、牡蛎属(Ostrea)、小蛎属(Saccostrea)、齿蛎属(Dendostrea)、舌骨牡蛎属(Parahyotissa)等(夏建军，2008)。其中，有趣的是，牡蛎属种类繁殖方式均为幼生型，而其它属种类均为卵生型。卵生型(Oviparous type)是指动物的受精卵在母体外独立发育，胚胎发育过程完全依靠卵细胞自身卵黄营养，可分为直接产卵排精及交配后产卵两种形式，绝大多数的贝类均属于这种繁殖方式。幼生型(Larvae type)牡蛎在繁殖时，精卵在鳃腔中受精，发育至面盘幼虫离开母体，经过浮游阶段，附着变态。它包括牡蛎属中的密鳞牡蛎(O.denselamellosa)、欧洲牡蛎(O.edulis)、希腊牡蛎(O.lurida)等(王如才等，2008)。那么，能否改变幼生型牡蛎繁殖方式，利用卵生型手段进行幼生型牡蛎的人工繁育，成为本发明的创新点。

发明内容：

本发明的目的是提供一种采用卵生型手段繁育幼生型牡蛎的方法，其可以改变幼生型牡蛎繁殖方式，提高其种群资源数量，大规模生产其苗种。

本发明的采用卵生型手段繁育幼生型牡蛎的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、亲本采集：在自然海区采集野生的牡蛎属幼生型牡蛎作为繁殖群体，该类牡蛎长相比较独特，右壳壳顶部较光滑鳞片愈合，其它鳞片密薄而脆，紧密地以覆瓦状排列，为了确保该亲本准确性，最好进一步采用分子手段进行物种鉴定；

b、性腺促熟：以自然条件下性腺发育较好的步骤a的繁殖群体或者促熟的步骤a的繁殖群体作为亲本，自然条件下性腺发育较好的牡蛎群体可以减少促熟时间，促熟方式可以采用室内促熟，也可以采用室外生态促熟。无论是哪一种促熟方式，均要保证饵料充足、水质清新、环境条件适宜。

c、精卵分离：待亲本性腺成熟，分离精卵，之后进行受精，获得受精卵；性腺成熟的标志：少数亲本个体鳃腔中有受精卵或者正在发育的胚胎。由于大部分幼生型牡蛎属于雌雄同体，所以在获得单体精卵时要格外小心。卵子收集方法：将成熟性腺解剖在盐度3-5ppt水中，浸泡2-5min，将其精子杀死；之后经过200目筛绢网过滤，去除大的组织块，400目筛绢网浓缩，去除小的碎组织块及死亡精子；最后，滤液放置于盐度为27-30ppt海水中进行30-60min浸泡激活卵子，激活成功的标准是卵变圆，生发泡消失。精子收集方法，在卵子激活成功后，通过镜检选择精子活力好的个体性腺，经过400目筛绢网过滤，去除卵子及大的组织块，滤液即为精子，该方法可以有效的收集纯度较高的精子；之后在海水激活5-15min，选取精子活性比例高的个体作为父本。受精前，检查卵子是否被精子污染，弃掉被污染个体卵液，使用尚未受精且激活好的卵子。最后，将精子倒入卵液中受精，每个卵子周围有3-5个精子比较合适；

d、子代培育：采用充气方式孵化受精卵，孵化密度控制在≤50个/mL，受精卵在温度28.2-29.4℃，盐度27-30ppt条件下，经过36h左右到达D形幼虫。对D形幼虫采用260目筛绢网选优(D形幼虫不能滤过260目筛绢网)，之后按照常规方法培养子代，即可获得大量该类牡蛎苗种。

步骤a所述的幼生型牡蛎指的是牡蛎属中的密鳞牡蛎、希腊牡蛎、欧洲牡蛎等，它们繁殖时精卵在鳃腔中受精，待受精卵发育至D形幼虫阶段排出体外，经过浮游阶段之后附着变态。