[发明专利]重组蛋白HarpinZΔ254-298的应用

权利要求书

1.氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的重组蛋白HarpinZ_Δ254-298在提高烟草抗烟草花叶病毒病效果、促进水稻生长中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的重组蛋白HarpinZ_Δ254-298通过以下步骤制备得到：

(1)以DH5α/pMD18-T-hrpZ_PsgS1菌株提取的质粒DNA为模板，用上游引物hrpZ_Δ254-298-P1、下游引物hrpZ_Δ254-298-P2进行反向PCR扩增，用凝胶回收试剂盒将反向PCR扩增的片段回收纯化，利用T4DNA连接酶将回收后的片段进行DNA分子自行环化后，转入大肠杆菌DH5α，经酶切及测序验证得到阳性重组菌株DH5α/pMD18T-hrpZ_Δ254-298，其中上游引物hrpZ_Δ254-298-P1序列如SEQ ID NO.3所示，下游引物hrpZ_Δ254-298-P2序列如SEQ ID NO.4所示；

(2)阳性重组菌株DH5α/pMD18-T-hrpZ_Δ254-298提质粒DNA，经BamH1和EcoR1双酶切后连接到表达载体pET30a(+)上，转入大肠杆菌BL21后经质粒PCR及酶切鉴定出阳性菌株BL21/pET30a(+)-hrpZ_Δ254-298；

(3)利用LB培养基培养阳性菌株BL21/pET30a(+)-hrpZ_Δ254-298，并利用IPTG诱导重组蛋白表达，菌体经超声波破碎获得粗提蛋白，纯化后得纯化的重组蛋白HarpinZ_Δ254-298。