[发明专利]用于植物寄生线虫核酸提取的试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.用于植物寄生线虫核酸提取的试剂盒，包括盒体；其特征在于，该盒体内设有一个9孔磁力架(1)，用于置放所述9孔磁力架和多瓶试剂的下凹位，以及成型纸盒(8)和盒内挡板(7)。

2.根据权利要求1所述用于植物寄生线虫核酸提取的试剂盒，其特征在于，所述9孔磁力架，设有分列两排的9个圆形孔；其中，一排设有3个供1.5ml离心管适用的孔；另一排设有6个供0.2ml离心管适用的孔。

3.根据权利要求2所述用于植物寄生线虫核酸提取的试剂盒，其特征在于，所述分列两排的9个圆形孔之间，设有可上下移动的磁力板(11)，所述磁力板11通过调节钮(13)沿磁力板调节道(12)上下移动。

4.根据权利要求1～3任一所述用于植物寄生线虫核酸提取的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括一个用于存放试剂盒说明书的槽位(6)。

5.根据权利要求1所述用于植物寄生线虫核酸提取的试剂盒，其特征在于，所述多瓶试剂，具体为：线虫核酸裂解液(2)、线虫核酸富集液(3)、线虫核酸洗涤液(4)和线虫核酸释放液(5)。

6.根据权利要求5所述用于植物寄生线虫核酸提取的试剂盒，其特征在于，所述线虫核酸裂解液(2)，包含：20mmol/L醋酸钾，5mmol/L乙二胺四乙酸，0.3M盐酸胍，0.2mM柠檬酸钠，O.1mM硫酸，O.1mM蛋白酶K。

7.根据权利要求5所述用于植物寄生线虫核酸提取的试剂盒，其特征在于，所述线虫核酸富集液(3)，主要由粒径为200nm的磁珠和缓冲液组成，所述缓冲液，具体为：2％PEG 2000，O.1mol/L NaCl，0.001mol/L KCl，0.01mol/LNa2HPO4，0.002mol/L KH2PO4，pH7.2～7.4。

8.根据权利要求5所述用于植物寄生线虫核酸提取的试剂盒，其特征在于，所述线虫核酸洗涤液(4)，包含：2mM乙二胺四乙酸和2mMTris-HCL。

9.根据权利要求5所述用于植物寄生线虫核酸提取的试剂盒，其特征在于，所述线虫核酸释放液(5)为20％乙醇溶液。

10.用于植物寄生线虫核酸提取的试剂盒的使用方法，其特征在于，该方法包括：

步骤一：向0.2mlpcr管里加入10ul灭菌水，将多条或单条线虫，挑取或吸取放入该管中，向管中加入2ul线虫核酸裂解液，56度水浴中保存30分钟；

步骤二：向上述步骤一中的pcr管中加入3ul线虫核酸富集液，充分混匀后，静置5分钟，此时形成磁珠-核酸复合体；

步骤三：将上述步骤二中的pcr管置于磁力架上，调节磁力板位置，使吸附点位于pcr管底部，待磁珠-核酸复合体充分被吸附到pcr管底部后，使用移液器将上清液全部吸出弃掉；

步骤四：将上述步骤三的pcr管从磁力架上取下，向其中加入10ul线虫核酸洗涤液，使用移液器轻吹打散磁珠-核酸复合体，静置5分钟后，重复步骤三，再次吸附磁珠-核酸复合体，弃上清液；

步骤五：将上述步骤四pcr管从磁力架上取下，向其中加入10ul线虫核酸释放液，使用移液器轻吹打散磁珠-核酸复合体，静置5分钟后，再次将pcr管置于磁力架上，此时核酸已释放于上清液中，小心吸取上清液，直接用于后续检测或-20℃冷冻保存待用。