[发明专利]一种红腺悬钩子组织培养与快速繁殖的方法

权利要求书

1.一种红腺悬钩子组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）红腺悬钩子的消毒和接种

当年11月至次年3月之间，剪取带腋芽的茎段，先用牙刷于自来水下轻柔刷洗，加入适量的洗洁精溶液浸泡2-4 min，用流水冲洗0.5 h后，在超净台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡2 min，用无菌水冲洗3次，浸入滴加有5滴吐温-80的0.1% HgCl₂溶液内浸泡消毒12-17 min，然后用无菌水充分浸洗3次，以正常的极性方向接种到添加有TDZ 0.5 mg/L，6-BA 2.0 mg/L的WPM基本培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为7 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121℃下高温高压灭菌20 min；接好外植体的培养基先置于黑暗中10 h，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 μmol/(m²·s)；

（2）丛生芽的诱导

当年11月至次年3月之间，剪取带腋芽的茎段，先用牙刷于自来水下轻柔刷洗，加入适量的洗洁精溶液浸泡2-4 min，用流水冲洗0.5 h后，在超净台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡2 min，用无菌水冲洗3次，浸入滴加有5滴吐温-80的0.1% HgCl₂溶液内浸泡消毒14-15 min，然后用无菌水充分浸洗3次，以正常的极性方向接种到添加有TDZ 0-2.0 mg/L，6-BA 0-5.0 mg/L ，IAA 0-5.0 mg/L，CH 0-1.0 mg/L的WPM基本培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为7.0 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121℃下高温高压灭菌20 min；接好外植体的培养基先置于黑暗中10 h，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 μmol/(m²·s)；

（3）不定芽的增殖

将上一步诱导获得的不定芽丛从茎段中分离，然后切成2-3株不定芽的芽块，接种到添加有TDZ 0-2.0 mg/L，6-BA 0-5.0mg/L ，IAA 0-5.0 mg/L，CH 0-1.0 mg/L的WPM基本培养基中进行培养，培养条件为：培养温度为(25±1)℃，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 μmol/(m²·s)；

（4）再生植株的生根培养

切取叶片嫩绿、生长旺盛且2~3 cm高的不定芽，插入到12.5%-100% WPM，NAA 0-1.0 mg/L ，IAA 0-2.0 mg/L，AC 0-2.0 mg的生根培养基中；

（5）炼苗移栽

待生根的组培苗的苗高长至5 cm以上，根长超过5 cm时，松开组培瓶的瓶盖，往瓶中注入少量清水，防止培养基干裂，但先不移开瓶盖，12 h后半挪开瓶盖，再过12 h，移走瓶盖，让灯光直照再生植株培养2 d；然后小心地将培养基捣碎，拿出再生植株，用水小心将残留的琼脂洗净，将植株定植于珍珠岩、泥炭重量比为 1：（1-5）的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保湿，室内温度控制在24-28℃之间；待新叶长出，即可揭开薄膜并叶面喷雾保持湿润，适应3-5 d后即可移栽大田中。

2. 根据权利要求1所述的一种红腺悬钩子组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于：在所述滴加有5滴吐温-80的0.1% HgCl₂溶液内浸泡消毒的时间为14-15 min。

3. 根据权利要求1所述的一种红腺悬钩子组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于：所述步骤（2）中WPM基本培养基中添加了TDZ 0.5 mg/L，6-BA 2.0mg/L ，IAA 0.5 mg/L，CH 0.1-0.2 mg/L。

4. 根据权利要求1所述的一种红腺悬钩子组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于：所述步骤（3）中WPM基本培养基中添加了TDZ 0.5 mg/L ，6-BA 1.0 mg/L ， IAA 1.0 mg/L，CH 0.1-0.2 mg/L。