[发明专利]焦磷酸测序法检测SIL-TAL1融合基因的引物对及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种焦磷酸测序法检测SIL-TAL1融合基因的引物对，包含所述引物对的试剂盒及该试剂盒的应用。

背景技术

SIL-TAL1融合基因包括SIL-TAL1(type II)、SIL-TAL1(type III)等多种类型，常见于T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)中。

当前国内外广泛使用的分子生物学检测SIL-TAL1融合基因的方法中，荧光原位杂交技术(FISH)只能进行定性检测、操作复杂；荧光定量PCR存在着检测通量的局限性，所以都还不能真正满足临床诊断检测的需要。传统的固相生物芯片(Biochip)或基因芯片技术存在着可重复性差、灵敏度不够好以及操作繁琐的突出弱点。

焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)是新一代DNA序列分析技术，具备同时对大量样品进行测序分析的能力，为高通量、低成本、快速、直观地进行核苷酸分析和临床检验提供了非常理想的技术操作平台。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的技术问题，本发明提出一种焦磷酸测序法同时检测SIL-TAL1融合基因的引入对以及含有所述引物对的试剂盒，可以同时检测SIL-TAL1(type II)和SIL-TAL1(type III)两种融合基因，具有高灵敏度、高特异性、高准确度、检测迅速等优点。

技术方案：为实现上述技术目的，本发明提出了一种焦磷酸测序法同时检测SIL-TAL1融合基因的引物对，所述的SIL-TAL1为SIL-TAL1(type II)和SIL-TAL1(type III)中的任意一种或两种，其特征在于，所述引物对包括：

(1)对于SIL-TAL1(type II)基因，

扩增引物为：

上游引物：5′-TACCCTGCAAACAGACCTCAGCT-3′，

下游引物：5′-TTCCCCCTTTTTCGCTGAGA-3′，

其中下游引物的5′端进行生物素标记；

测序引物为：

5′-AGAGGCCTGCAGTTAC-3′；

(2)对于SIL-TAL1(type III)基因：

扩增引物：

上游引物：5′-CCTCCCAAAATGCTGATCG-3′，

下游引物：5′-GTCTTTGCTTTCCCCCTTTTTC-3′，

其中下游引物的5′端进行生物素标记；

测序引物：

5′-GGCCTGCAGTTACGCT-3′。

本发明进一步提出了一种焦磷酸测序法检测SIL-TAL1融合基因的试剂盒，该试剂盒包含上述的引物，具体地，所述试剂盒包含如下引物：

(1)对于SIL-TAL1(type II)：

扩增引物：

上游引物：5′-TACCCTGCAAACAGACCTCAGCT-3′，

下游引物：5′-TTCCCCCTTTTTCGCTGAGA-3′，

其中下游引物的5′端进行生物素标记；

测序引物：

5′-AGAGGCCTGCAGTTAC-3′；

(2)对于SIL-TAL1(type III)：

扩增引物：

上游引物：5′-CCTCCCAAAATGCTGATCG-3′，

下游引物：5′-GTCTTTGCTTTCCCCCTTTTTC-3′，

其中下游引物的5′端进行生物素标记；

测序引物：

5′-GGCCTGCAGTTACGCT-3′。

更具体地，所述试剂盒还包括质控品。所述质控品包括阳性对照品和阴性对照品，其中，所述的阳性对照品为含有SIL-TAL1(type II)和SIL-TAL1(type III)的质粒的混合液，所述的阴性对照品作为对照，与阳性对照品相比为不含SIL-TAL1(type II)和SIL-TAL1(type III)的质粒溶液。

本发明还提出了上述引物对及包含上述引物对的试剂盒在制备检测SIL-TAL1融合基因的试剂中的应用。

有益效果：与现有技术相比，本发明的焦磷酸测序法检测SIL-TAL1融合基因的试剂盒能够实现快速、简便、高效、准确的检测SIL-TAL1(type II)和SIL-TAL1(type III)融合基因，为制备用于检测SIL-TAL1(type II)和SIL-TAL1(type III)融合基因的试剂提供了理论基础。