[发明专利]检测鸡传染性喉气管炎病毒、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测鸡传染性喉气管炎病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒的试剂盒。

背景技术

随着我国养禽业集约化程度的不断提高，各类疾病的发生也呈逐年上升的趋势。我国禽病防治的总体水平不高，禽病的发生和危害仍然十分严重，据不完全统计，目前危害我国养禽业生产的疾病达80余种，其中传染病约占禽病总数的75％，危害严重。同时禽病的发生也出现新的特点，如新的传染病不断出现；新发生禽病的种类增多；传染病发病的非典型化和病原出现新的变化；混合感染和复合症使疾病更为复杂等。

鸡新城疫、鸡传染性支气管炎和鸡传染性喉气管炎这3种病在我国和许多国家地区广泛流行，受病毒侵袭的鸡群会引起大批死亡，耐过的生长发育缓慢，淘汰率增高，并干扰其它疫苗的免疫力，使鸡易继发感染其它疾病，而造成严重的经济损失。这3种病的共同特征都能引起呼吸道症状，而且症状十分相似，在临床诊断中很难准确判断，也极易与其它呼吸道病如禽流感、慢性呼吸道病等相混淆。现有的禽病检测或监测技术均存在不可克服的局限，如对疫病的混合感染、隐性感染及疫苗毒和野毒的区分等，在检测时均存在一定的困难。同时对于多种疫病的混合感染需要同一种方法或不同方法多次进行检测，因此有必要加强对动物疫病检测或监测新型技术的研究。

目前，对这3种病的诊断一般采用病原分离鉴定和常规的血清学方法，但这些方法存在操作繁杂、费时费力、敏感性较差等不足。特别是当鸡群存在鸡新城疫、鸡传染性支气管炎和鸡传染性喉气管炎等多种病毒感染时，难以应用这些传统方法进行快速检测和鉴别诊断，在一定程度上影响了对这些疫病的有效防制。最近国内外均建立了PCR/RT-PCR检测方法，以及多重PCR检测方法，但是还不能满足更加快速、准确的检测多种病原混合感染的要求。因此，有必要建立DNA微阵列检测技术对鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎病毒进行鉴别诊断，建立快速、准确的早期诊断和检测方法，以便尽快采取有效的针对性防治措施，减少这些疾病对养禽业造成的损失。用DNA微阵列检测技术对鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎病毒进行鉴别诊断的方法是十分必要的，具有重要的现实意义。

分子生物学理论和技术的发展，特别是基因芯片有高通量、多样性、微型化和自动化的特点，这些特性使它上面的信息能快速准确地被读出，对样品的量要求很少，节约试剂和成本，处理速度大大加快，在对各种病原体的检测中，病原体基因的检测和分析是最可信的，而基因芯片技术能对各种病原体的RNA进行定性和定量的分析，从而帮助临床医生对感染的种类和感染的程度进行分析。

公开号为1616679和1616678的专利申请分别公开了检测包括鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒等10种或9种病毒的基因芯片，但是该文件中没有芯片的特异性和灵敏度试验，不能说明其可以特异且灵敏地同时检出鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡传染性喉气管炎病毒。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种特异强、灵敏度高可同时检测检测鸡传染性喉气管炎病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒的新的基因芯片和试剂盒。

本发明检测鸡传染性喉气管炎病毒、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒的试剂盒，其特征在于：它包括鸡传染性喉气管炎病毒、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒的基因扩增试剂以及检测用基因芯片；

所述扩增鸡传染性喉气管炎病毒的试剂包括SEQ ID NO：7～8和/或SEQ ID NO：9～10所示引物对；扩增鸡新城疫病毒基因的试剂包括SEQ ID NO：11～12和/或SEQ ID NO：13～14所示引物对；扩增鸡传染性支气管炎病毒基因的试剂包括SEQ ID NO：15～16和/或SEQ ID NO：17～18所示引物对；所述引物对中，上游引物与下游引物的摩尔比是1:1；

所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1或2所示任意一个或者两个基因片段，SEQ ID NO：3或4所示任意一个或者两个基因片段以及SEQ ID NO：5或6所示任意一个或者两个基因片段。

优选地，所述扩增试剂还包括荧光染料标记的dNTP。进一步优选地，所述荧光染料为Cy3荧光染料或者Cy5荧光染料。

优选地，所述试剂盒还包括SEQ ID NO：20～21所示引物对；所述基因芯片还包括定位探针，定位探针是SEQ ID NO：19所示的基因片段。

优选地，所述固相载体为氨基化基片。