[发明专利]一种细胞内黑色素的快速检测与成像的方法

权利要求书

1.一种细胞内黑色素的快速检测与成像的方法，其特征是包括以下步骤：

（1）配制氨银溶液、氯金酸水溶液和硫代硫酸钠水溶液；

（2）取黑色素细胞，采用培养液培养后，制备细胞爬片，将细胞爬片置于步骤（1）配制的氨银溶液中，调节温度为56~60℃孵育5~20min，清洗后加入步骤（1）配制的氯金酸水溶液孵育2 ~5min，清洗后再采用步骤（1）配制的硫代硫酸钠水溶液处理1~3min后洗净，制得金属-黑色素复合材料；

（3）选用NIR激光，对金属-黑色素复合材料进行照射，采用拉曼光谱仪器进行信号采集，选取1000~1700 cm^-1范围的光谱强度值进行成像，从成像图中获取黑色素的定位和分布信息以及每个黑色素检测点的量化光谱曲线及强度值，实现细胞内黑色素的快速检测与成像；

步骤（1）中氨银溶液的配制过程是：选取硝酸银水溶液，逐滴加入氨水，边加边摇晃，直到沉淀颗粒消失，然后再加入硝酸银水溶液，直到液体出现非常浅的乳白色时停止滴加，其中硝酸银水溶液的浓度为40~50 g/L；

步骤（1）中氯金酸水溶液的浓度为4~5 mM，硫代硫酸钠水溶液的浓度为40~60 g/L。

2.根据权利要求1所述的细胞内黑色素的快速检测与成像的方法，其特征是：步骤（2）中培养液为RPMI-1640培养液；采用培养液培养时采用CO₂培养箱，37 ℃，含体积百分含量为5% 的CO₂，贴壁培养。

3.根据权利要求1所述的细胞内黑色素的快速检测与成像的方法，其特征是：步骤（2）中细胞爬片置于步骤（1）配制的氨银溶液前，先用PBS清洗1~3次后再用体积百分含量为4~10%的中性甲醛固定5~10min，超纯水清洗。

4.根据权利要求1所述的细胞内黑色素的快速检测与成像的方法，其特征是：步骤（2）中清洗或洗净采用超纯水。

5.根据权利要求1所述的细胞内黑色素的快速检测与成像的方法，其特征是：步骤（3）中激光波长为785nm，功率为2~25mW，中心波长1350 cm^-1。

6.根据权利要求1所述的细胞内黑色素的快速检测与成像的方法，其特征是：步骤（3）中信号采集可采用点扫描模式或线扫描模式，对于点扫描模式，曝光时间为5~10s，对于线扫描模式，曝光时间为1~2s。