[发明专利]检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片以及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片以及试剂盒。

背景技术

随着我国养禽业集约化程度的不断提高，各类疾病的发生也呈逐年上升的趋势。我国禽病防治的总体水平不高，禽病的发生和危害仍然十分严重，据不完全统计，目前危害我国养禽业生产的疾病达80余种，其中传染病约占禽病总数的75％，危害严重。同时禽病的发生也出现新的特点，如新的传染病不断出现；新发生禽病的种类增多；传染病发病的非典型化和病原出现新的变化；混合感染和复合症使疾病更为复杂等。

鸡新城疫、鸡传染性支气管炎这2种病在我国和许多国家地区广泛流行，受病毒侵袭的鸡群会引起大批死亡，耐过的生长发育缓慢，淘汰率增高，并干扰其它疫苗的免疫力，使鸡易继发感染其它疾病，而造成严重的经济损失。这3种病的共同特征都能引起呼吸道症状，而且症状十分相似，在临床诊断中很难准确判断，也极易与其它呼吸道病如禽流感、慢性呼吸道病等相混淆。现有的禽病检测或监测技术均存在不可克服的局限，如对疫病的混合感染、隐性感染及疫苗毒和野毒的区分等，在检测时均存在一定的困难。同时对于多种疫病的混合感染需要同一种方法或不同方法多次进行检测，因此有必要加强对动物疫病检测或监测新型技术的研究。

目前，对这2种病的诊断一般采用病原分离鉴定和常规的血清学方法，但这些方法存在操作繁杂、费时费力、敏感性较差等不足。特别是当鸡群存在鸡新城疫、鸡传染性支气管炎等多种病毒感染时，难以应用这些传统方法进行快速检测和鉴别诊断，在一定程度上影响了对这些疫病的有效防制。最近国内外均建立了PCR/RT-PCR检测方法，以及多重PCR检测方法，但是还不能满足更加快速、准确的检测多种病原混合感染的要求。

分子生物学理论和技术的发展，特别是基因芯片有高通量、多样性、微型化和自动化的特点，这些特性使它上面的信息能快速准确地被读出，对样品的量要求很少，节约试剂和成本，处理速度大大加快，在对各种病原体的检测中，病原体基因的检测和分析是最可信的，而基因芯片技术能对各种病原体的RNA进行定性和定量的分析，从而帮助临床医生对感染的种类和感染的程度进行分析。

曹三杰，“鸡新城疫、鸡传染性支气管炎基因芯片的构建及其检测技术研究”，四川农业大学2004年博士论文公开了一种同时检测鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片，其对鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒的最低检测浓度分别为0.44ng/μL和0.87ng/μL，灵敏度低。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种特异强、灵敏度高可检测检测鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒的新的基因芯片和试剂盒。

本发明检测鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒的基因芯片，它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1～2所示任意一个或者两个基因片段，和/或SEQ ID NO：3～4所示任意一个或者两个基因片段。

基因芯片，又叫DNA微阵列，是指指通过不同方法将生物分子(寡核苷酸、cDNA、genomic DNA、多肽、抗体、抗原等)固着于硅片、玻璃片(珠)、塑料片(珠)、凝胶、尼龙膜等固相递质上形成的生物分子点阵，其突出的特点是微型化、集成化、平行化和高通量。

优选地，它还包括定位探针，定位探针是SEQ ID NO：13所示的基因片段。

本发明检测鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒的试剂盒，它包括前述的基因芯片与扩增鸡新城疫病毒和/或鸡传染性支气管炎病毒基因的试剂，其中，扩增鸡新城疫病毒基因的试剂包括SEQ ID NO：5～6和/或SEQ ID NO：7～8所示引物对；扩增鸡传染性支气管炎病毒基因的试剂包括SEQ ID NO：9～10和/或SEQ ID NO：11～12所示引物对。

所述试剂盒还包括SEQ ID NO：14～15所示引物对。

所述引物对中，SEQ ID NO：5所示上游引物与SEQ ID NO：6所示下游引物的摩尔比为1：10；SEQ ID NO：7、9、11所示上游引物与SEQ ID NO：8、10、12所示下游引物的摩尔比为1：20。

所述上游引物标记有荧光染料。

所述试剂盒还包含有胶体金。

胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。