[发明专利]翘嘴红鲌精液冷冻保存液

说明书

技术领域

本发明涉及一种翘嘴红鲌精液冷冻保存液，属于水产养殖技术领域。 

背景技术

精子在液氮超低温(-196℃)条件下细胞的代谢基本停止，处于假死状态，可以长期保存。鱼类精子的低温冷冻保存对于鱼类繁殖育种、资源保护和遗传改良都具有重要意义。一些鱼类物种特异的精子冷冻方案已经建立。鱼类精子冷冻首先要将精液稀释于冷冻保存液中，平衡一段时间后再进行降温冷冻。冷冻保存液除了无机盐(如NaCl、KCl、NaHCO₃、KHCO₃和柠檬酸钠等)和渗透性防冻剂之外，往往还会添加一些非渗透性抗冻剂。非渗透性抗冻剂是一类不能透过细胞膜的大分子物质，主要有糖类，如葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、棉籽塘、麦芽糖等；脂类，如磷脂、胆固醇等；蛋白质类，如卵黄、脱脂奶粉、小牛血清、抗冻蛋白等，以及其他添加剂，如氨基酸、抗生素、抗氧化剂等。冷冻保存液的成分到目前为止仍然没有一个统一的定论，一般认为应根据不同鱼类精子特性进行逐个试验筛选。而不同的非渗透性抗冻剂及不同使用浓度，对不同物种精子冷冻保存，具有不同的作用。 

翘嘴红鲌是我国淡水水域常见的一种大型淡水经济鱼类。其肉洁白鲜嫩，营养价值较高，是肉食性名贵鱼类，具有很高的经济价值和生态价值。有关翘嘴红鲌精子冷冻保存过程中各个环节的研究在国内外未见报道，本发明涉及的翘嘴红鲌精液冷冻保存液也是无意中的发现，从而完善了翘嘴红鲌的精子冷冻保存方案，具有实际应用和推广价值。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种可以降低冷冻对精子的损伤同时可以提高冻精活率的翘嘴红鲌精液冷冻保存液。 

本发明解决所述技术问题的方案是：一种翘嘴红鲌精液冷冻保存液，所述冷冻保存液中含有海藻糖和谷氨酰胺。 

作为进一步的技术方案，所述的冷冻保存液以稀释液为基质，每1000mL冷冻保存液中含有34.23g海藻糖和2.9g谷氨酰胺。 

作为进一步的技术方案，所述冷冻保存液中，含有8％(体积百分数)乙二醇。 

作为进一步的技术方案，所述的稀释液为HBSS稀释液。 

作为进一步的技术方案，所述稀释液的组成为， 

每1000mL稀释液中含有 

本发明的有益效果：采用本发明所述的冷冻保存液，翘嘴红鲌精液解冻后，精子的活率在70％以上，经过冷冻保存及复苏后的冻精人工授精得到的受精卵与鲜精人工授精得到的受精卵相比，平均孵化率无显著差异。 

具体实施方式

实施例1 

一、配制含海藻糖和谷氨酰胺的翘嘴红鲌精液冷冻保存液 

配制稀释液：准确称取氯化钠7.896g、氯化钾0.396g、七水合硫酸镁0.195g、十二水合磷酸氢二钠0.072g、磷酸二氢钾0.054g、碳酸氢钠0.345g3、葡萄糖0.99g溶于1000mL蒸馏水中，充分混匀，分装至离心管中，放到冰箱里冷冻备用。 

配制冷冻保存液：在配制好的HBSS稀释液中加入防冻液乙二醇至终浓度为8％(体积百分数)，海藻糖和谷氨酰胺的终浓度分别为34.23g/L和2.9g/L。即翘嘴红鲌精液冷冻保存液每1000mL组成如下： 

乙二醇    80mL 

海藻糖    34.23g 

谷氨酰胺  2.9g 

适用于翘嘴红鲌精液冷冻保存液的稀释液即HBSS稀释液补足至1000mL。 

为说明该冷冻保存液的效果，配置3种用于对比的冷冻保存液。 

第一种对比的冷冻保存液每1000mL组成如下： 

乙二醇  80mL 

第二种对比的冷冻保存液每1000mL组成如下： 

乙二醇  80mL 

海藻糖  34.23g 

第三种对比的冷冻保存液每1000mL组成如下： 

乙二醇    80mL 

谷氨酰胺    2.9g 

二、获取可用的精液 

选取性成熟的雄性翘嘴红鲌亲鱼，轻压腹部使白色精液流出，精液采集后应立即放在4℃冰箱内，防止精子活力下降，同时对采集的多管精液进行精子活力鉴定，具体步骤为在载玻片上滴10μl纯水，取5μl鲜精于纯水中，立即用显微镜观察其活力，精子活力在90％以上的精液用于精子冷冻。 

三、精液的冷冻