[发明专利]一种抗H7亚型禽流感病毒单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗H7亚型禽流感病毒单克隆抗体及其应用，属于生物技术领域，涉及抗体工程技术。具体为抗H7-AIV高效价单克隆抗体，对禽源和哺乳动物源的H7-AI毒株均具有高效价，可以用于H7-AI发病禽和哺乳动物的现场快速诊断。

背景技术

人感染H7N9禽流感疫情是由H7N9禽流感病毒引起的急性呼吸道感染性疾病，其中重症肺炎病例常可合并急性呼吸窘迫综合征、感染性休克，甚至多器官功能衰竭。

H7N9亚型禽流感（H7-AI）是由H7亚型禽流感病毒（H7-AIV）引起的禽和哺乳动物的一种呼吸道传染病。人感染H7N9禽流感疫情是由H7N9禽流感病毒引起的急性呼吸道感染性疾病，该病2013年2月在我国发生，H7-AIV对家禽无致病力或低致病力，家禽能感染但不发病。但该病毒存在变异成高致病性毒株的可能性，将对家禽产业发展带来更大风险。传染源可能为携带H7N9亚型AIV的禽类。H7N9禽流感可经呼吸道传播，或密切接触感染禽类的分泌物或排泄物而获得感染；或通过接触病毒污染的环境传播至人。目前阳性样品主要来自活禽交易场点，但不排除少数养禽场存在污染。在发病前1周内接触过禽类或者到过活禽市场者，特别是老年人，属于高危人群。

人感染H7N9禽流感潜伏期一般为3～4天。感染率现在还没有确切的流行病学调查数据，病死率为31.66%。患者一般表现为流感样症状（如发热、咳嗽、少痰，可伴有头痛、肌肉酸痛、腹泻等全身症状）。重症患者病情发展迅速，多在发病3-7天出现重症肺炎，体温大多持续在39℃以上，出现呼吸困难，可伴有咯血痰。常快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症、感染性休克，甚至多器官功能障碍，部分患者可出现胸腔积液等表现。患者白细胞总数一般不高或降低。重症患者多有白细胞总数及淋巴细胞减少，可有血小板降低。

到2013年8月10日，上海、安徽、江苏、浙江、北京、河南、山东、江西、湖南、福建、河北、广东和台湾等13省（市）共报告确诊病例135例，其中死亡45例。2013年10月中旬开始，浙江、广东、广西、台湾、上海、江苏、福建、北京、安徽、湖南、贵州、吉林等12省（市、自治区）和香港特别行政区、台湾等又开始发生H7N9疫情，截至2014年3月20日已累计报告病例379例，死亡120例。病例以老年人居多，男性多于女性(男:女=2.034:1)。大部分人感染H7N9禽流感确诊者为散发病例，有个别家庭聚集发病现象，但尚无持续人际间传播的证据；不排除有限的非持续的人传人。人感染H7N9禽流感疫情对我国家禽产业带来了严重冲击。据中国畜牧业协会统计，2013年上半年家禽产业直接损失600亿元，2014年以来已损失200亿元。

早发现、早报告、早诊断、早治疗，加强重症病例救治，注意中西医并重，是有效防控、提高治愈率、降低病死率的关键。《人感染H7N9禽流感诊疗方案》（2014版）明确“在病例早期识别中宜首选核酸检测”，但核酸检测需时长。只有在建立该病快速诊断方法的基础上，才能做到早发现、早报告、早诊断、早治疗，实现提高治愈率、降低病死率的目标。

H7N9禽流感为2013年2月开始在中国发生的一种新的疫情，可感染人和家禽，人感染后出现严重的流感样临床症状，导致高病死率。家禽感染后一般不表现临床症状，成为人感染H7N9禽流感疫情的传染源，因此建立一种快速直观的病原检测方法，对于及时发现、剔除家禽中的H7N9流感病毒，切实保障养禽业生产安全、动物产品质量安全和公共卫生安全也必将发挥重要作用。

本发明从鸽肛拭子检测分离到1株H7N9禽流感病毒，以灭活的该病毒为免疫原和检测抗原，运用杂交瘤技术建立了分泌抗H7-AIV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞库，通过ELISA试验和HI试验筛选出了分泌高效价（腹水HI效价为11 log2，ELISA效价为2×10⁵）单克隆抗体杂交瘤细胞5D2株，利用该抗体研制的胶体金免疫层析检测试纸条检测方法具有特异性强、敏感性高，检测临床样品10分钟内出结果，结果直观易于判断，肉眼即可做出判断。

发明内容

技术问题

本发明的目的是提供一种抗H7亚型禽流感病毒单克隆抗体，及用该单克隆抗体组装的胶体金试剂盒在H7-AI快速诊断上的应用。杂交瘤细胞株的建立是用灭活的H7-AIV为抗原，免疫BALB/c鼠，利用杂交瘤技术建立抗H7-AIV特异单克隆抗体杂交瘤细胞库获得的。用该杂交瘤细胞制备的BALB/c鼠腹水，建立胶体金免疫层析试纸条检测方法，组装成试剂盒，用于家禽和哺乳动物等感染H7-AIV（包括H7N9）的临床快速诊断。