[发明专利]疫苗组合物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种制备含猪肺炎支原体抗原的疫苗组合物的方法，其中，该方法包括：(1)培养猪肺炎支原体，灭活；(2)使用非离子表面活性剂处理步骤(1)灭活的猪肺炎支原体；以及(3)分离出该经使用非离子表面活性剂处理后的不可溶于非离子表面活性剂的抗原成分，加入佐剂。本发明还提供该制备方法制备的含猪肺炎支原体抗原的疫苗组合物去除免疫抑制成分，同时最大限度的保留了免疫活性成分；当与猪圆环病毒抗原共同作用时，对其没有抑制作用，对猪的肺病变有较好的保护效果。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及含猪支原体肺炎抗原的疫苗组合物及其制备方法。

背景技术

猪支原体肺炎(Mycoplasmalpneumonia of swine,MPS)又称猪喘气病(李彦明,张映.猪肺炎支原体生物学研究进展,动物医学进展,2003,24(3):25-27)或猪地方性流行性肺炎，是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)所引起的一种猪接触性慢性呼吸道疾病，分布十分广泛，以慢性、接触性、高度传染性、高发病率以及低死亡率等为特点，主要表现为咳嗽和呼吸困难，解剖可见肺组织呈肉变或大理石样病变。

衣阿华大学Ross研究发现：Mhp感染后淋巴细胞产生抗体的能力下降，细胞免疫力下降，肺泡巨噬细胞对病原的吞噬和清除能力亦下降，抑制性T细胞的活动增强，导致呼吸道免疫力减弱，抗病力下降，从而使其他病原体更容易侵入，可继发感染猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环等，从而导致多种疫苗接种失败。Mhp可经空气传播，易与其他细菌性疾病如猪肺疫、传染性胸膜肺炎等并发(王茂文,猪肺炎支原体病的特点及其防制措施.畜禽业,2008(2):16-17；Dee S,Otake S,Oliveira S,et al.Evidence of long distance airbornetransport of porcine reproductive and respiratory syndrome virus andMycoplasma hyopneumoniae.Veterinary research,2009,40(4):39)，对养猪业造成重大的经济损失，是当前最常发生、最广流行、最难净化的重要疫病之一。

中国专利申请CN88101554A公开了猪肺炎支原体膜蛋白含有免疫抑制成分的抗原蛋白，而且公开了用一种用非离子表面活性剂处理猪肺炎支原体膜的方法，进而是进行处理得到非免疫抑制的抗原的技术方案，但公开的技术方案需先得到猪肺炎支原体膜，得到膜的过程需要冻融循环、超声处理等，操作过程繁琐，且其抗原没有使用不含猪肺炎支原体菌体的上清培养液中的可溶性抗原。

专利申请TW 201345550A公开了一种猪肺炎支原体疫苗，采用不含猪肺炎支原体菌体的上清培养液的可溶性抗原通过蛋白质A过滤的技术方案，且公开了直接培养灭活的猪肺炎支原体疫苗影响猪圆环病毒疫苗的抗体效价，通过该发明公开的技术方案可以避免这种干扰。但其没有除去猪肺炎支原体的免疫抑制成分，且用蛋白质A柱处理增加了工艺步骤和造成污染的可能。

因此，采用简便的方法制备无猪肺炎支原体免疫抑制抗原且对猪圆环病毒疫苗不产生拮抗作用的猪肺炎支原体疫苗是本领域技术人员急需解决的技术问题。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明要解决的第一个问题是提供一种猪肺炎支原体疫苗，猪肺炎支原体疫苗不会导致免疫抑制的发生，其采用的技术方案为，使用非离子表面活性剂处理猪肺炎支原体培养物。

所述的非离子表面活性剂处理的猪肺炎支原体抗原是指在灭活的猪肺炎支原体培养物中加入非离子表面活性剂分离出非离子表面活性剂不可溶解部分。

本发明解决的第二个技术问题是提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物中包括猪肺炎支原体抗原和猪圆环病毒抗原，其中猪肺炎支原体抗原部分不对猪圆环病毒抗原产生干扰作用。