[发明专利]一种直观筛选抑制黄曲霉毒素的微生物菌种的方法

说明书

技术领域

本发明涉及应用微生物、生物防治和真菌毒素等技术领域，具体的说是一种直观筛选抑制黄曲霉毒素的微生物菌种的方法。 

背景技术

黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉等真菌产生的有毒次级代谢产物，是自然界中已发现的毒性最强的真菌毒素，其急性毒性是剧毒化学药品氰化钾的10倍以上，并且，还具有强致癌性，免疫抑制性和致畸形性，被国际癌症机构列为一类致癌物质。黄曲霉毒素可在作物收获前和贮藏期间广泛污染谷类作物，油料作物，豆类作物，及其加工品，对人类和动物健康危害极大，并导致农业经济损失严重。因此，如何有效地防止黄曲霉毒素污染农产品都是一个亟待解决的重大课题，以往的防治黄曲霉毒素污染食品的方法主要是用物理和化学方法清除食品中已污染的毒素或使其失去毒性，不仅成本大，而且效果也不理想，利用化学农药防治黄曲霉菌侵染作物和食品也曾被利用，但近年来，由于化学农药导致的环境污染问题越来越被各国科学家和政府所重视，利用对环境友好的生物防治已成为研究热点。 

生物防治黄曲霉毒素污染的关键是筛选出能高效抑制黄曲霉毒素产生菌生长和产毒的生防微生物菌种，由于黄曲霉毒素是极毒的真菌代谢产物，产生后，肉眼又不能直接观测到，必须借助相关仪器和分析手段才能检测到毒素的产生情况，不仅手续繁琐，而且容易造成环境污染，危害操作人员的健康，因此，建立一种直观、快速、安全、低成本筛选能高效抑制黄曲霉毒素的微生物菌种的方法非常重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种适合于从海洋微生物、陆地微生物、植物内生菌等诸多不同生境来源的微生物中直观、快速、安全、低成本筛选出能高效抑制黄曲霉毒素的微生物菌种的方法。 

本发明解决上述技术问题采用的技术方案是：一种直观筛选抑制黄曲霉毒素的微生物菌种的方法，其特征包括如下步骤：

（1）所使用的黄曲霉毒素指示菌株为寄生曲霉DM菌株；

（2）所使用的筛选培养基为能提供海洋微生物、陆地微生物、植物内生菌等各类微生物生长的各种固体培养基；

（3）根据待筛选微生物种类的不同，制备适宜的固体培养基平板；

（4）在平板四周点接接种4个不同的微生物菌种，在25-35度恒温培养箱中培养0-2天后，再在平板中央接种DM菌株，继续培养3-4天后，观察培养结果；

（5）眼睛直接观察平板中DM菌株的菌丝生长和橘红色降散盘衣酸的产生，凡是能抑制DM菌株菌丝中橘红色降散盘衣酸的产生和/或菌丝生长的微生物菌种，即是能抑制黄曲霉毒素产生的微生物菌种。

本发明与其他筛选方法显著不同在于第一是使用寄生曲霉DM菌株为指示菌株，DM菌株具有在菌丝体中累积人眼睛可见的橘红色的黄曲霉毒素生物合成途径中的中间产物降散盘衣酸的能力，因此，可以通过眼睛直接观察寄生曲霉DM菌株的菌丝体中是否显示橘红色而判断是否有中间产物降散盘衣酸的产生，进而进一步判断是否有黄曲霉毒素的产生，凡是能抑制橘红色降散盘衣酸产生的微生物菌种，即具备抑制黄曲霉毒素产生的能力，因此，结果观察直观、简单、方便、快速；第二是DM菌株不产生黄曲霉毒素，因此，不会对环境和操作人员带来黄曲霉毒素的危害，因此，该发明操作安全；第三是只需要人的眼睛观察结果，不需要复杂的仪器设备检测即可判断对黄曲霉毒素的抑制效果，且培养时间只有3-6天，具有快速、低成本的特点，可对大量样品进行筛选。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。 

实施例1：抑制黄曲霉毒素的海洋微生物菌种的筛选 

按括号内的配方制备固体培养基平板（酵母提取物3 g，麦芽膏3 g，蛋白胨5 g，葡萄糖10 g，琼脂15g，天然海水1000mL），在平板四周分别接种四个海洋微生物菌种，在25度恒温培养2天后，在平板中央接种寄生曲霉DM菌株，继续培养4天后，观察培养结果，凡是能抑制橘红色降散盘衣酸在菌丝中产生的菌种，即是能抑制黄曲霉毒素合成的海洋微生物菌种，如图1所示。

图1是平板筛选能抑制橘红色降散盘衣酸产生的海洋微生物菌种的图。图1中正向方的菌株为具有抑制橘红色降散盘衣酸产生的海洋微生物菌种，亦即能抑制黄曲霉毒素产生的海洋微生物菌种。 

实施例2：抑制黄曲霉毒素的陆地微生物菌种的筛选