[发明专利]从油橄榄叶中提取分离橄榄苦甙的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物活性成分提取技术领域，主要涉及一种从油橄榄叶中提取分离橄榄苦甙的方法。

背景技术

油橄榄属木犀科木犀榄属常绿乔木，是世界著名的木本油料兼果用树种，在我国福建、广西、广东、四川、云南等地区广泛种植。现代生物技术分析表明油橄榄叶中含有大量的生物活性物质，其抗氧化活性成分较橄榄果更为突出，尤其是橄榄苦甙等多酚类化合物在叶中的含量明显高于果实和树皮。橄榄苦甙在临床上作为药品，能抑制病毒、细菌、微生物及其引起的毒素，对LDL胆固醇具有抗氧化作用，改善高血压、高血脂等心血管疾病，提高T淋巴细胞、NK细胞、吞噬细胞等的再生能力，加强细胞对病毒和感染的免疫能力。由于橄榄苦甙易氧化，吸湿性很强，不易结晶，所以高纯度的橄榄苦甙不易得到。为了保证了纯度，势必会增加纯化步骤，从而降低了收率，也大大增加了生产成本，不适合工业化生产。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一从油橄榄叶中提取分离橄榄苦甙的方法，该方法步骤简单，可同时保证的橄榄苦甙的纯度和收率，适合工业化生产。

本发明提供的技术方案是一种从油橄榄叶中提取分离橄榄苦甙的方法，包括以下步骤：

1)将油橄榄叶粉碎，加入其重量6～12倍的水，在水浴条件下回流提取2～3次，每次提取0.5～2.5h，合并提取液，过滤，取滤液备用；

2)将滤液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相减压浓缩至无乙酸乙酯，得到橄榄苦甙粗提物；

3)将橄榄苦甙粗提物加水溶解，加入混合溶液1～2倍重量的硅胶，搅拌均匀，干燥后装入层析柱，用乙醇洗柱，薄层层析跟踪监测，收集含目标成分的洗脱液；

4)将洗脱液浓缩，干燥，即为高纯度橄榄苦甙。

上述步骤3)中，所述乙醇体积浓度为10～30％。

上述步骤3)中，所述干燥是在55～65℃下干燥3～5h。

上述步骤3)中，乙醇的洗脱流速为1～2BV/h。

上述步骤3)中，水的用量为橄榄苦甙粗提取重量的1～2倍。

水浴回流提取可以确保橄榄苦甙最大程度溶出又不被分解，可以确保橄榄苦甙的收率；有机溶剂萃取可有效去除叶绿素、叶黄素、类胡萝卜素等脂溶性杂质和大分子杂质，进一步提高橄榄苦甙的纯度；硅胶层析可去掉混合溶液中盐类、糖类以及多酚物质，进一步实现橄榄苦甙的富集，提高其纯度。

与现有技术相比，本发明步骤简单，对设备要求较低，可同时保证的橄榄苦甙的纯度和收率，适合工业化生产。

具体实施方式

以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。

实施例1

1)将5000g油橄榄叶粉碎，加入其重量6倍的水，在水浴条件下回流提取2次，每次提取0.5h，合并提取液，过滤，取滤液备用；

2)将滤液加入沸程为60℃的石油醚，充分振摇萃取，静置分层，分液，石油醚相回收石油醚，残渣弃去，水相用乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相减压浓缩至干，得到橄榄苦甙粗提物；

3)将橄榄苦甙粗提物加入其1倍重量的水溶解，得到混合溶液，再往混合溶液中加入其1倍重量的硅胶，搅拌均匀，在55℃下干燥3h后装入层析柱，用10v％乙醇洗柱，洗脱流速为1～BV/h，薄层层析跟踪监测，收集含目标成分的洗脱液；

4)将洗脱液在40℃下减压回收溶剂，真空冷冻干燥，得到221g高纯度橄榄苦甙，经HPLC检测，成品中橄榄苦甙的含量为90.5％。

实施例2

1)将5000g油橄榄叶粉碎，加入其重量12倍的水，在水浴条件下回流提取3次，每次提取2.5h，合并提取液，过滤，取滤液备用；

2)将滤液加入沸程为90℃的石油醚，充分振摇萃取，静置分层，分液，石油醚相回收石油醚，残渣弃去，水相用乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相减压浓缩至干，得到橄榄苦甙粗提物；

3)将橄榄苦甙粗提物加入其2倍重量的水溶解，得到混合溶液，再往混合溶液中加入其2倍重量的硅胶，搅拌均匀，在65℃下干燥5h后装入层析柱，用30v％乙醇洗柱，洗脱流速为2BV/h，薄层层析跟踪监测，收集含目标成分的洗脱液；

4)将洗脱液在50℃下减压回收溶剂，真空冷冻干燥或喷雾干燥，得到228g高纯度橄榄苦甙，经HPLC检测，成品中橄榄苦甙的含量为92.5％。

实施例3

1)将5000g油橄榄叶粉碎，加入其重量9倍的水，在水浴条件下回流提取3次，每次提取1.5h，合并提取液，过滤，取滤液备用；