[发明专利]一种定量检测茜草中芦西丁含量的方法

说明书

技术领域

本发明是涉及一种定量检测芦西丁含量的方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

芦西丁为蒽醌类化合物，其化学名为：1,3–二羟基–2–羟甲基蒽醌，已在欧茜草等植物中检出。

欧茜草(R.tinctorum L.)亦称洋茜草，属茜草科植物，最早在埃及、波斯和印度等地被当作红色染料使用，后来逐渐被引种到意大利、荷兰、德国和法国，在我国新疆及喜马拉雅地区也有分布，在国内亦被称为新疆茜草，以根作为茜草收购使用。欧茜草常被作为通便剂或一种温和的镇静剂，用以治疗肾结石和膀胱结石或者用于治疗月经不调或泌尿系统紊乱等症。通过鼠伤寒沙门氏菌TA98/TA100/TA102/TA104对该着色剂进行突变试验等毒性研究结果显示，从欧茜草中所得到的提取物具有遗传毒性。此后的研究又发现，导致这种遗传诱变毒性的物质是一种蒽醌类物质–芦西丁。在对茜草蒽醌毒性–结构关系的进一步研究中发现，该类物质的诱变性与其2位的基团有关，芦西丁及其ω–醚衍生物均显示出较强的致基因突变性，而那些被氧化成醛或羧酸的芦西丁衍生物并未显示出该遗传毒性。此外，在对欧茜草的致癌性研究中发现，被灌服一定剂量欧茜草的大鼠中，肝细胞腺瘤和肾小管上皮细胞癌的发生率有不同程度的提高，这也可能与欧茜草中的芦西丁成分有关。因此，欧洲及日本等国家和地区对欧茜草的使用均作出了限制。

中国内地产的茜草为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.，据《中国药典》2010年版一部规定，作为中药的茜草为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根及根茎，春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥，主产于我国东北、华北、西北和四川及西藏等地，性寒、味苦，归肝经，常用于吐血、衄血、崩漏、外伤出血、瘀阻经闭、关节痹痛、跌扑肿痛。茜草的主要成分为蒽醌及其苷类化合物，还含有萘醌类、萜类、己肽类、多糖类等其他化学成分，主要的药理作用包括止血、抗血小板聚集、升白细胞、镇咳祛痰、抗菌、抗癌等。

目前，针对中药茜草(Rubia cordifolia L.)相关有害成分的研究报道较少，现行《中国药典》一部“茜草”项下的含量测定中只规定了大叶茜草素和羟基茜草素的含量测定方法，未涉及其他物质的定量分析内容。

为保证用药的安全和提高药品的疗效，有必要对包含欧茜草(R.tinctorum L.)和茜草 (Rubia cordifolia L.)的植物药及其制剂中的芦西丁含量进行检测和控制。但现有技术中，尚无快速、有效定量测定植物中芦西丁含量的方法。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种定量检测芦西丁含量的方法，以实现对包含欧茜草(R.tinctorum L.)和茜草(Rubia cordifolia L.)的植物药及其制剂中的芦西丁含量进行有效监控，提高用药安全性。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种定量检测芦西丁含量的方法，为高效液相色谱–质谱联用法，是先用高效液相色谱仪对测试品溶液进行高效液相分离，再利用质谱仪中的多反应监测模式(MRM)将母子离子对中质荷比为269.1/223.3及269.1/251.1的子离子作为特征碎片离子进行监测，然后将所获得的多反应监测模式色谱图与芦西丁对照品溶液的多反应监测模式色谱图进行比对，当测试品溶液多反应监测模式色谱图中出现与芦西丁对照品溶液多反应监测模式色谱图中的子离子色谱峰保留时间一致的色谱峰时，对质荷比为269.1/251.1的子离子色谱峰的峰面积进行积分，采用外标法计算测试品中的芦西丁含量。

作为优选方案，所述测试品溶液和芦西丁对照品溶液均以甲醇为溶剂。

作为进一步优选方案，所述的芦西丁对照品溶液的浓度为0.02～0.2μg/mL。

作为进一步优选方案，所述测试品溶液的配制方法如下：精密称取过四号筛的测试品粉末约0.2～1.0g，精密加入甲醇10～50mL，称重，放置12～24小时后用超声波处理20～40 分钟，放冷，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液。

作为优选方案，所述的高效液相色谱仪选用Agilent高效液相色谱仪，色谱柱的长度为 50～150mm，色谱柱的内径为2.1～4.6mm，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，填充剂粒径为 1.5～5.0μm。