[发明专利]一种裂解组合物及其用途、试剂盒、利用该裂解组合物制备核酸的方法、核酸分析的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种裂解组合物及其用途、试剂盒、利用该裂解组合物制备核酸的方法、核酸分析的方法。

背景技术

荧光定量PCR(qPCR)，是一种基于多聚酶链反应PCR(PolymeraseChainReaction)的在许多方面改进的DNA扩增技术。定量PCR在thermalcycler仪器中进行时仪器通过发射特殊波长的光束照亮每一个DNA样本以及探测激发荧光团(fluorophonre)发出的荧光。qPCR需要使用荧光探针或荧光引物，目标DNA在即时扩增时其变化的数量可以通过一台实时PCR仪器同时进行监测。另外，qPCR还可以同时扩增一个或多个目标DNA序列。

qPCR(quantitativePCR)在对DNA模板上要求严格，一般需要从生物样品中提取纯净DNA才能进行。常规繁琐的提取DNA主要方法如下：(1)经典常规的苯酚氯仿(phenol/chloroformDNAextraction)抽提法时间长、抽提步骤繁琐且毒性大，不能够用于高通量实验。此外苯酚氯仿化学试剂已经被证明是实验室重要的致癌物质，长期接触将对操作人员的身体造成不可逆的伤害，对健康与安全形成较大的威胁；(2)离子交换纯化柱法(Spincolumn)，用silica膜收集DNA，步骤繁琐，多次使用离心机和换离心管，实验过程中DNA易丢失，提取量少，且价格昂贵，并且还产生较多不易消除的废料。上述2个方法都不利于高通量；(3)磁珠法(Magnetbeads，又称玻璃珠分离法)：用磁珠提纯DNA方法步骤相对简便，较少换离心管，但也多个步骤，并且需要高价值昂贵自动化工作站特殊设备。，磁珠提纯DNA方法所采用的自动化工作站就是非常典型的高价值设备。此外，磁珠分离DNA法虽然较少换离心管，但也多个步骤，并且需要昂贵的特殊设备。这些现有技术需要多次更换离心管或多次清洗-收集DNA，容易导致样品交叉污染。直接进行实时PCR而不需要提取DNA方法的报道非常有限的。因此，提供一种无需经过提纯核酸、能够直接用于核酸分析的裂解组合物，试剂盒、用该裂解组合物制备核酸的方法、以及核酸分析的方法具有现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种裂解组合物及其用途、试剂盒、利用该裂解组合物制备核酸的方法以及核酸分析的方法。该裂解组合物可以快速简捷制取核酸直接用于核酸分析。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种裂解组合物，包括A或B或两者的组合物；

所述A选自NaOH，KOH或者Ca(OH)₂；所述B为PEG。

PEG，聚乙二醇。也称为聚(环氧乙烯)(PEO)或聚氧乙烯(POE)，是指环氧乙烷的寡聚物或聚合物。这三个名称现今一般为同义词，但历史上聚乙二醇往往是指分子质量低于20,000g/mol的低聚物和聚合物，PEO是指分子量超过20,000的聚合物，POE则可指任何分子质量的聚合物。PEO以及POE根据分子量的不同，可为液体或低熔点液体。由于链长的影响，不同分子量的聚乙二醇往往有不同的物理性质(如黏度)及不同的应用。作为优选，PEG的分子量为100～2000。

本发明的一些实施例中，裂解组合物中所述A的浓度为0.1～200mmol/L，所述B的浓度为1～200mg/mL。

本发明的一些实施例中，裂解组合物还包括反应终止物。在本发明的一些实施例中，反应终止物可以为终止裂解反应的物质。作为优选，所述反应终止物为TurboBuffer。任何可以终止生物样品裂解反应的试剂均可以应用，本发明在此不作限定。

本发明的一些实施例中，当所述裂解组合物中包括A和B时，所述A与所述B的摩尔比为0.1～200：0.45～1.05。

本发明还提供了上述裂解组合物用于裂解生物样品制备核酸的应用。

在本发明的一些实施例中，所述生物样品与所述裂解组合物的质量体积比为：1：1～1：10(以g/mL计)。

本发明的一些实施例中，所述生物样品包括真核生物或原核生物。

本发明的一些实施例中，所述真核生物包括动物、植物、微生物。

本发明的一些实施例中，所述动物包括动物液体组织、动物固体组织。

本发明的一些实施例中，所述动物液体组织包括唾液、尿液、血液、胃液、胸积水、肺部积水、腮腺细胞、淋巴液、骨髓液、奶液、眼泪、精液、脊髓液，脑髓，羊水，关节液或鼻液中的一种或两者以上的组合物。