[发明专利]用于猕猴桃杂交群体雌雄性别鉴定的SSR分子标记A003

说明书

技术领域

本发明涉及分子遗传育种技术领域，尤其涉及一种用于猕猴桃杂交群体雌雄性别鉴定的SSR分子标记A003（A003是为区别其它SSR分子标记而命名的，A为猕猴桃拉丁名Actinidia的首字母），即用于猕猴桃幼苗雌雄性别性状的早期分子辅助选择，以提高育种效率，减少土地和人力成本。

背景技术

猕猴桃（Actinidia chinensis Planch.)富含果实维生素C、膳食纤维和多种矿物营养，被誉为“水果之王”，是一种有益健康的新兴高档水果。随着人民生活水平的迅速提高，对高品质和新品种猕猴桃的需求显著增加，猕猴桃育种效率亟待提升。猕猴桃为功能性雌雄异株植物，具有花形态相似但雌雄器官相异的雌花和雄花。猕猴桃杂交后代的雌雄分离比例约为1：1，鉴于猕猴桃雌雄异株的性别功能，猕猴桃果园通常配置少量授粉雄株以保证果园产量和果实品质，剩余的雄株则除掉。作为多年生果树，猕猴桃在传统育种中面临着童期长、占地面积大等问题。猕猴桃幼苗往往下地种植数年后才能开花，利用猕猴桃花形态结构的差异方能鉴别植株的雌雄性别，因此在开花前的数年内大量的不结果雄株给育种工作造成了极大的浪费。由于缺乏可用的猕猴桃雌雄性别鉴别的分子标记，猕猴桃植株的早期性别鉴定工作一直难以开展。SSR标记具高多态性、位点特异性、稳定性高和操作程序简单等优势，是一种检测方便的共显性遗传标记。结合遗传学和基因组学研究成果，开展猕猴桃分子标记辅助育种研究，构建经济、高效的分子育种技术体系，已经成为猕猴桃育种的重要研究方向。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点和不足，提供一种用于猕猴桃杂交群体雌雄性别鉴定的SSR分子标记A003。

具体要求是：

筛选出用于猕猴桃早期性别鉴定的SSR分子标记A003；

提供上述SSR分子标记A003的获得方法；

提供上述SSR分子标记A003在猕猴桃性别鉴定以及标记辅助育种中的应用。

本发明的目的是这样实现的：

利用猕猴桃高密度遗传图谱，定位花性别表型性状位点，在性别决定区间筛选SSR标记，最终得到能用于猕猴桃早期性别鉴定的SSR分子标记A003，形成本项发明的技术方案。猕猴桃植株早期性别鉴定在很大程度减少育种前期在土地、生产资料和人力成本的浪费，有着重要的理论学术意义和较高的经济价值。

一、SSR分子标记A003

用于猕猴桃杂交群体雌雄性别鉴定的SSR分子标记A003（简称SSR分子标记A003），其雄株扩增得到的特异片段核苷酸序列如SEQ.ID No1所示；其雌株扩增得到的特异片段核苷酸序列如SEQ.ID No2所示。

分子标记是基于猕猴桃性别决定区域的简单重复序列多态性开发的。根据性别相关区域的序列信息设计特异性引物，SSR分子标记A003的PCR扩增产物表现为雄株和雌株各扩增得到两条谱带，其中一条谱带片段大小相同。雄株扩增得到的特异谱带大小为287bp，特异片段核苷酸序列如SEQ.ID No1所示；雌株扩增得到的特异谱带大小为304bp，特异片段核苷酸序列如SEQ.ID No2所示。通过特异片段的大小和特异核苷酸序列可以区分猕猴桃雌雄性别。

本发明还提供了扩增上述分子标记的引物。

所述S001标记的引物序列如SEQ.ID No3 和 SEQ.ID No4 所示。

二、SSR分子标记A003获得方法

分子标记获得方法包括下列步骤：

①构建猕猴桃高密度遗传图谱；

②收集性别表型转换为表型标记；

③在遗传图谱上定位表型标记；

④在基因组序列上确定性别决定区间；

⑤筛选性别决定区间内SSR标记。

其工作机理是：

基因组中存在许多简单序列重复（SSR）单元，其数目存在高度变异。由于特定的SSR的侧翼序列通常都是保守性较强的单一序列，因而可以根据侧翼序列合成引物进行PCR扩增，从而将单个微卫星位点扩增出来。由于单个微卫星位点重复单元在数量上的变异，个体的扩增产物就产生长度的多态性，以此来检测等位基因的多态性。

三、SSR分子标记A003应用

SSR分子标记A003在山梨猕猴桃和中华猕猴桃‘桂海4号’杂交群体中的应用