[发明专利]一种猪瘟抗体检测系统及其制备方法

权利要求书

1.一种猪瘟抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述ELISA检测试剂盒包括各孔中包被有猪瘟病毒E2蛋白和Erns蛋白的酶标板；所述猪瘟病毒E2蛋白含量为100-400ng/孔，Erns蛋白含量为25-100ng/孔，其中，所述猪瘟病毒E2蛋白为实质上编码序列SEQ ID No.2的蛋白，所述Erns蛋白为实质上编码序列SEQ ID No.4编码的蛋白；所述猪瘟病毒E2蛋白和Erns蛋白为真核表达体系表达的重组蛋白。

2.根据权利要求1所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述猪瘟病毒E2蛋白含量为200ng/孔，Erns蛋白含量为50ng/孔。

3.根据权利要求1所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述真核表达体系为重组杆状病毒表达体系。

4.根据权利要求1所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述ELISA检测试剂盒还包括样品稀释液、洗涤液、封闭液、带标记的二抗、显色液、终止液、阳性猪血清对照以及阴性猪血清对照。

5.根据权利要求4所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为含有0.05％V/VTween-20和10％V/V脱脂奶的磷酸盐缓冲液；

所述洗涤液为含有0.05％V/VTween-20的磷酸盐缓冲液；

所述封闭液为1％W/VBSA的磷酸盐缓冲液、5％W/V脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液、1.5％V/V明胶的磷酸盐缓冲液或5％V/V犊牛血清FCS的磷酸盐缓冲液中的任一种；

所述显色液包括显色液A液和显色液B液，所述显色液A液含TMB 20mg、无水乙醇10ml，并用ddH₂O定容至100ml；所述显色液B含柠檬酸2.1g、无水Na₂HPO₄ 2.82g、0.75％W/V的过氧化氢尿素0.64ml，并用ddH₂O定容至100ml；

所述终止液为2M的H₂SO₄。

6.一种如权利要求1所述的ELISA检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

步骤(1)克隆表达所述猪瘟病毒抗原性蛋白E2蛋白、Erns蛋白，使用所述E2蛋白和Erns蛋白包被酶标板；

步骤(2)制备或配制样品稀释液、洗涤液、封闭液、HRP标记的兔抗猪IgG、显色液A液、显色液B液、终止液、阳性猪血清对照以及阴性猪血清对照；以及

步骤(3)将步骤(1)与(2)所制备的各成分组装成试剂盒。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中克隆表达E2蛋白为实质上编码序列SEQ ID No.2的蛋白，所述Erns蛋白为实质上编码序列SEQ ID No.4编码的蛋白。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述E2蛋白含量为100-400ng/孔，Erns蛋白含量为25-100ng/孔。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述猪瘟病毒E2蛋白含量为200ng/孔，Erns蛋白含量为50ng/孔。

10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)使用真核表达体系表达猪瘟病毒E2蛋白和Erns蛋白。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述真核表达体系为重组杆状病毒表达体系。

12.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述样品稀释液为含有0.05％V/VTween-20和10％V/V脱脂奶的磷酸盐缓冲液；

所述洗涤液为含有0.05％V/VTween-20的磷酸盐缓冲液；

所述封闭液为1％W/VBSA的磷酸盐缓冲液、5％W/V脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液、1.5％V/V明胶的磷酸盐缓冲液或5％V/V犊牛血清FCS的磷酸盐缓冲液中的任一种；

所述显色液包括显色液A和显色液B液，所述显色液A液含TMB 20mg、无水乙醇10ml，并用ddH₂O定容至100ml；所述显色液B含柠檬酸2.1g、无水Na₂HPO₄ 2.82g、0.75％W/V的过氧化氢尿素0.64ml，并用ddH₂O定容至100ml；

所述终止液为2M的H₂SO₄。