[发明专利]黄曲霉毒素B1的抗原模拟表位AM‑1及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及黄曲霉毒素B₁抗原模拟表位AM-1及其应用。

背景技术

黄曲霉毒素B₁(aflatoxin B₁，AFB₁)是主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次级代谢产物，广泛存在于花生、棉籽、玉米、小麦和稻米等农作物中。AFB₁对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡，1993年被WHO的癌症研究机构划定为I类致癌物。因此，食品中AFB₁的检测对于人类健康意义重大。

目前，检测食品中AFB₁的方法主要有高效液相色谱、气相色谱、薄层色谱及免疫学检测等方法，免疫学检测方法以其灵敏度高、检测方便、成本低廉等优势在AFB₁的检测中得到了广泛的应用。然而，AFB₁ 全抗原的化学合成方法目前仍然存在着诸多弊端：1）作为全抗原的合成原料，AFB₁标准品不仅具有极强的致癌毒性，而且价格昂贵，使得 AFB₁ 全抗原的制备成本高昂，限制了 AFB₁ 免疫学检测体系的规模化应用；2）AFB₁ 全抗原的化学合成制备过程繁杂，中间副产物多、从而造成全抗原的生产批次误差大、质量不均一，成为影响免疫学检测方法准确性的重要技术瓶颈；3）AFB₁ 全抗原的化学合成过程中，使用的有机试剂、中间产物及废水、废渣易对操作人员产生毒害并严重污染周边环境。 鉴于此，开展 AFB₁ 全抗原的无害化替代性制备研究，将其应用于免疫学检测体系，解决化学合成制备 AFB₁ 全抗原过程中所面临的强毒性、高成本、高污染、批间误差大等关键问题，不仅具有重要的理论价值，也有显著的应用前景。

本发明通过用噬菌体展示肽库技术，从肽库中筛选出能与靶分子（抗AFB₁单克隆抗体）特异性结合的多肽（抗原模拟表位），该抗原模拟表位具有与天然AFB₁分子相似的免疫反应特性，通过获得的AFB₁抗原模拟表位，以代替价格昂贵且毒性强的AFB₁标准品，并作为竞争抗原或固相包被抗原应用于AFB₁的免疫学检测。

发明内容

本发明以抗AFB₁单克隆抗体为靶分子，将靶分子固相包被于酶标板上，投入噬菌体随机展示十二肽库，分别进行亲和性竞争洗脱淘选，获得了能与抗AFB1抗体特异性结合的AFB₁的抗原模拟表位，命名为AM-1，其氨基酸序列如下：

从噬菌体随机十二肽库中筛选的AFB₁抗原模拟表位AM-1，其氨基酸序列为：WPLYYYPWSDGA

上述抗原模拟表位AM-1结构中，大写英文字母分别代表二十一种已知天然L-型氨基酸残基或其D-型异构体的一种，即W代表色氨酸残基，P代表脯氨酸残基，Y代表酪氨酸残基，S代表丝氨酸残基，D代表天冬氨酸残基，G代表甘氨酸残基，A代表丙氨酸残基。

本发明还涉及编码上述抗原模拟表位氨基酸序列的核苷酸序列，其序列为：

GGCCTCTGTATTATTATCCTTGGTCTGATGGTCTGAT。

发明提及的AFB₁抗原模拟表位AM-1可通过噬菌体扩增、化学合成或基因工程重组表达的方式进行大量制备。噬菌体扩增是指将展示有AFB₁抗原模拟表位（多肽）的噬菌体，通过生物扩增的方式，大量繁殖生产展示有AFB₁抗原模拟表位（多肽）的噬菌体粒子。化学合成是指依据公布的模拟表位的氨基酸序列，通过化学合成多肽的方式进行多肽合成。基因工程重组表达的方式是指将编码模拟表位的基因，通过克隆至表达载体，以多肽-融合蛋白的形式进行AFB₁抗原模拟表位的大量制备。

本发明还涉及所述黄曲霉素B₁抗原模拟表位在免疫学检测分析中的应用。免疫学检测的类型包括酶联免疫吸附检测、胶体金免疫层析、免疫斑点杂交等基于抗原-抗体特异性反应的免疫学分析检测类型。