[发明专利]垂穗披碱草幼穗离体培养再生植株方法

权利要求书

1.一种垂穗披碱草幼穗离体培养再生植株方法，其特征在于包括以下步骤：

1)外植体的获取：取处于雌雄蕊分化期、长度约为3.0-10cm的幼穗，剪取垂穗披碱草植株上半部，去掉外层的叶片后在无菌条件下用棉球蘸取70％乙醇擦拭其茎秆和叶鞘，用消过毒的镊子小心剥取幼穗，将其切成2-3mm的小段；

2)愈伤组织诱导：将外植体接种于愈伤诱导培养基上，每皿接种幼穗小段，放入培养室培养，培养室温度为24-26℃，光照时间16h/d，黑暗时间8h/d，培养时间为1-2个月；

3)将诱导的愈伤组织接种于继代培养基中进行培养，培养室温度为24-26℃，光照时间16h/d，黑暗时间8h/d，在继代培养基中培养20-30d；

4)将步骤3)的垂穗披碱草愈伤组织转移至分化培养基中培养，培养室温度为24-26℃，光照时间16h/d，黑暗时间8h/d，在分化培养基中培养的时间为20-30d；

5)待愈伤组织有绿芽长出，将其转移至生根成苗培养基上进行培养，培养室温度为24-26℃，光照时间16h/d，黑暗时间8h/d；

6)待有5条以上健壮根长出，将三角瓶上的封口膜去掉，同时加入5mL的蒸馏水，炼苗3d，然后将小植株从三角瓶中取出，洗净根部的培养基，最后移栽于混有草炭土和蛭石比例为1:1的花盆中，最初3d给幼苗遮上塑料薄膜以保持湿度。

2.如权利要求1所述的垂穗披碱草幼穗离体培养再生植株方法，其特征在于所述的愈伤组织诱导培养基为：硝酸钾1900mg/L，硝酸铵1650mg/L，七水合硫酸镁370mg/L，二水合氯化钙440mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，四水合硫酸锰22.3mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，硼酸6.2mg/L，碘化钾0.83mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2.0mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，烟酸0.5mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，七水合硫酸亚铁27.8mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，2,4-二氯苯氧乙酸3.0mg/L。

3.如权利要求1所述的垂穗披碱草幼穗离体培养再生植株方法，其特征在于所述的继代培养基为：硝酸钾1900mg/L，硝酸铵1650mg/L，七水合硫酸镁370mg/L，二水合氯化钙440mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，四水合硫酸锰22.3mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，硼酸6.2mg/L，碘化钾0.83mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2.0mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，烟酸0.5mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，七水合硫酸亚铁27.8mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7.0g/L，2,4-二氯苯氧乙酸2.0mg/L。

4.如权利要求1所述的垂穗披碱草幼穗离体培养再生植株方法，其特征在于所述的分化培养基为：硝酸钾1900mg/L，硝酸铵1650mg/L，七水合硫酸镁370mg/L，二水合氯化钙440mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，四水合硫酸锰22.3mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，硼酸6.2mg/L，碘化钾0.83mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2.0mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，烟酸0.5mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，七水合硫酸亚铁27.8mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7.0g/L，激动素1.0mg/L和6-氨苄基腺嘌呤1.0mg/L。

5.如权利要求1所述的垂穗披碱草幼穗离体培养再生植株方法，其特征在于所述的生根成苗培养基配方：所述的生根成苗培养基为：1/2MS培养基为硝酸钾950mg/L，硝酸铵825mg/L，磷酸二氢钾85mg/L，七水合硫酸镁185mg/L，二水合氯化钙220mg/L，四水合硫酸锰22.3mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，硼酸6.2mg/L，碘化钾0.83mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.025mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，肌醇100mg/L，甘氨酸2.0mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，盐酸硫胺素0.1mg/L，烟酸0.5mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，七水合硫酸亚铁27.8mg/L，蔗糖30g/L，琼脂7.0g/L。