[发明专利]一种基于TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体及重组细胞

权利要求书

1.一种基于TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体，其特征在于，包括TALEN真核表达载体和打靶载体；

所述的TALEN真核表达载体包括TALEN左臂表达载体和TALEN右臂表达载体，分别识别TALEN靶点的上游和下游识别位点，TALEN靶点位于牛基因组28号染色体SFTPA1和MAT1A基因的基因间序列；

所述的打靶载体上克隆有重组基因MSR1-Sp110-PolyA，并克隆有作为同源臂的TALEN靶点上游和下游的同源序列；

所述的重组基因MSR1-Sp110-PolyA是在Sp110基因的上游连接牛巨噬细胞特异性启动子MSR1，在下游连接PolyA；

所述的TALEN左臂表达载体上克隆有TALEN左臂，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；

所述的TALEN右臂表达载体上克隆有TALEN右臂，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示；

所述的重组基因MSR1-SP110-PloyA中，SP110的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.3所示，MSR1的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.4所示。

2.如权利要求1所述的基于TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体，其特征在于，还在TALEN左臂/TALEN右臂的下游连接T2A间隔、荧光标签GFP和mCherry。

3.如权利要求1所述的基于TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体，其特征在于，所述的同源臂包括分别位于重组基因MSR1-SP110-PloyA上游、下游的上游同源臂和下游同源臂，上游同源臂与MSR1-SP110-PloyA之间还设有一对同向的Loxp，Loxp之间设有第一筛选基因，下游同源臂的下游还设有第二筛选基因。

4.如权利要求3所述的基于TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体，其特征在于，上游同源臂的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.5所示，下游同 源臂的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.6所示。

5.如权利要求1所述的基于TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体，其特征在于，所述的TALEN真核表达载体为pCS2-TALEN，其TALEN左臂表达载体和TALEN右臂表达载体，分别通过在pCS2-Fok I载体上连接TALEN左臂、TALEN右臂而构建；

所述的打靶载体为pLR-SP110-Neo，是将MSR1-SP110-PloyA插入到打靶骨架载体pCS2-Neo的第二Loxp的下游，将上游同源臂连接在第一Loxp的上游，将下游同源臂连接在MSR1-SP110-PloyA的下游而构建。

6.一种基于权利要求1所述的TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体构建的重组细胞，其特征在于，以牛胎儿成纤维细胞为宿主细胞，通过TALEN真核表达载体和打靶载体共同转染到宿主细胞中，将目的基因Sp110整合到宿主细胞的基因组的28号染色体M-S位点。

7.如权利要求6所述的TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体构建的重组细胞，其特征在于，所述的共同转染是将TALEN真核表达载体和打靶载体共同电转到宿主细胞中，电转染参数设置如下：电压：510V；脉冲时间：3ms；电击次数1次。

8.权利要求7所述的TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体构建的重组细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞的应用。