[发明专利]肉与肉制品中马源成分的检测方法及驴源成分的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，尤其涉及一种肉与肉制品中马源成分的检测方法及驴源成分的检测方法。

背景技术

随着市场经济的不断深入发展，部分不法商贩为了谋求不正当利益，在肉或肉制品中掺杂其他价格便宜的肉种，在肉及肉制品市场出现了一种以次充好、以假乱真的现象。肉或肉制品中掺有标称以外的其他价格便宜的动物源性成分，有的甚至全部为标称以外的其他价格便宜的动物源性成分，这极大地损害了消费者的利益，扰乱了流通市场秩序和健康发展，同时也对民族宗教信仰造成一定的潜在冲突。

传统一般采用感官方法对肉或肉制品的色泽、气味、组织形状等参数进行判断，但是其可靠性较差，尤其是添加了色素和芳香剂等添加剂或者经过其它加工处理的肉及肉制品而言，感官方法判断准确性更低。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种肉与肉制品中马源成分的检测方法及驴源成分的检测方法，本发明提供的检测方法结果准确、可靠。

本发明提供了一种用于检测肉与肉制品中马源成分的试剂盒，包括：如SEQ ID No.1所示的上游引物和如SEQ ID No.2所示的下游引物。

本发明以Genbank上已经登录公布的所有马的Cytb基因序列为基础，运用生物软件DnaStar进行序列比对分析，找出来自不同国家、地区、品种马、的Cytb基因种内保守序列区域，用于设计上下游扩增引物，将所设计出的各物种PCR扩增引物进行再次比对，排除种间交叉性，保证扩增的特异性。同时，找出马的Cytb基因序列中共有的同源序列，设计哺乳动物检测引物，用以对各检测体系进行监控。最后，将获得的各物种上下游扩增引物序列提交Gembank，进行Blast确认，以确保所设计的引物序列对目前已经公布的DNA序列没有非特异性检测扩增，并选定上游引物和下游引物。本发明选用特定的上游引物和下游引物用于检测肉与肉制品中的马源成分，其具有良好的特异性，从而能够实现对马源成分的检测。

以如SEQ ID No.1所示的上游引物和如SEQ ID No.2所示的下游引物进行PCR扩增，其扩增位点及扩增片段大小如表1所示：

表1 马源成分的扩增位点及扩增片段大小

所述上游引物的浓度优选为0.1μM～0.5μM，更优选为0.5μM；所述下游引物的浓度优选为0.1μM～0.5μM，更优选为0.5μM。

所述试剂盒中还包括DNA聚合酶、10×PCR Buffer溶液和去离子水，所述DNA聚合酶的浓度优选为0.5-1u/μL。所述试剂盒中还包括，所述10×PCR Buffer溶液具体包括：100mM Tris-Hcl(pH8.3)，500mM KCl，15mM MgCl₂。

本发明还提供了一种肉与肉制品中马源成分的检测方法，包括以下步骤：

提取肉样品或肉制品样品的DNA；

以所述DNA为模板进行PCR扩增，所述PCR扩增反应体系中的上游引物如SEQ ID No.1所示，下游引物如SEQ ID No.2所示；

对所述PCR扩增产物进行电泳，鉴定所述扩增产物。

本发明首先提取肉样品或者肉制品样品中的DNA，本发明对所述DNA的提取方法没有特殊限制，小量提取时可以使用商业试剂盒提取，大量提取时可以按照CTAB-NaCl法进行提取，具体而言：

小量提取时，其提取方法为：

a.将称取的肉糜，放入研钵中，加入液氮，待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状，研磨时应间断加入液氮以防止材料融化；

b.将研钵移入65℃水浴，当样品粉末刚开始融化时，向研钵中加入700μl的Solution A和1.2μl的Rnase A，研磨30秒；

c.收集650μl研磨好的组织匀浆至Collection Tube中。如匀浆体积不足650μl，补充Solution A至650μl。65℃保温10分钟；

d.加入400μl的Solution B，振荡混匀；

e.加入1ml的4℃预冷的Solution C，充分混匀后，12000rpm离心2分钟；

f.弃去上层有机相，再加入1ml的4℃预冷的Solution C，充分混匀后，12000rpm离心2分钟；

g.弃去上层有机相，然后将水相溶液(无色下层)转移至置于Collection Tube上的Filter Cup中，12000rpm离心1分钟；