[发明专利]利用纸质微流体进行核酸等温扩增的方法

权利要求书

1.一种利用纸质微流体进行核酸等温扩增的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备待测样品DNA溶液；

(2)根据检测项目，将相应的引物包被在纸质微流体的反应区(22)上，所述纸质微流体包括由滤纸制成的反应层(2)和至少一层加样层(1)，所述加样层(1)重叠放置在反应层(2)的上方，所述加样层(1)中心设有加样孔(11)，所述加样层(1)上围绕加样孔(11)均布有多个反应孔(12)，所述加样孔(11)和反应孔(12)的孔口上均涂覆有疏水材料；所述反应层(2)上设有由疏水材料画出的与加样孔(11)相对应的样品区(21)、与反应孔(12)对应的多个反应区(22)以及反应通道(23)，所述反应区(22)直径与反应孔(12)的直径相同，所述样品区(21)的直径小于加样孔(11)的直径，每个反应区(22)通过一个反应通道(23)与样品区(21)连通，所述反应通道(23)的宽度从反应区(22)到样品区(21)逐渐变小；

(3)将步骤1制备的待测样品DNA溶液根据检测项目混合成扩增反应体系，滴加在纸质微流体的加样孔中，加热纸质微流体使其温度达到核酸扩增所需要的温度并保持恒温；

(4)扩增反应完成后，观察纸质微流体反应区的颜色变化，即可得到检测结果。

2.如权利要求1所述的利用纸质微流体进行核酸等温扩增的方法，其特征在于，所述步骤2中在纸质微流体的反应区(22)上包被引物是通过生物素化引物和亲和素化微凝胶偶联结合，室温干燥沉淀在反应区(22)上。

3.如权利要求1所述的利用纸质微流体进行核酸等温扩增的方法，其特征在于，所述步骤2中的纸质微流体的加样层(1)为两层以上，从上到下加样层(1)的加样孔(11)的直径逐层缩小，所述样品区(21)的直径小于最下层加样层(1)的加样孔(11)的直径。

4.如权利要求1所述的利用纸质微流体进行核酸等温扩增的方法，其特征在于，所述步骤2中的纸质微流体的所有反应孔(12)的圆心在同一圆周上，所有反应区(22)的圆心也在同一圆周上。

5.如权利要求1所述的利用纸质微流体进行核酸等温扩增的方法，其特征在于，所述步骤2中的纸质微流体上的疏水材料为石蜡或者二甲基硅氧烷或者SU-8光阻胶。

6.如权利要求1所述的利用纸质微流体进行核酸等温扩增的方法，其特征在于，所述步骤3中加热纸质微流体的方法为将纸质微流体放入预先调好温度的人工培养箱中。

7.如权利要求1所述的利用纸质微流体进行核酸等温扩增的方法，其特征在于，所述步骤2中的纸质微流体还包括位于反应层(2)下方的加热层(3)，所述加热层(3)由滤纸制成，其下表面上设有电阻丝(31)。

8.如权利要求7所述的利用纸质微流体进行核酸等温扩增的方法，其特征在于，所述步骤3中加热纸质微流体的方法为电阻丝(31)外接可变电阻，接通电流，调节可变电阻，使得纸质微流体的温度达到扩增所需要的温度。

9.如权利要求7所述的利用纸质微流体进行核酸等温扩增的方法，其特征在于，所述步骤2中的纸质微流体的加热层(3)的电阻丝(31)为由金属粉喷射沉淀而成。

10.如权利要求1～9任一所述的利用纸质微流体进行核酸等温扩增的方法，其特征在于，所述步骤2中的纸质微流体的加样层(1)、反应层(2)和加热层(3)由双面胶层(4)粘贴叠加固定，其中所述加样层(1)之间、加样层(1)与反应层(2)之间的双面胶层(4)上设有与位于其上方的加样层(1)的加样孔(11)和反应孔(12)对应的孔。