[发明专利]同时检测独一味中环烯醚萜苷、苯乙醇苷、黄酮、咖啡酰类成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及同时检测独一味中环烯醚萜苷、苯乙醇苷、黄酮、咖啡酰类成分的方法。

背景技术

独一味Lamiophlomis rotata(Benth.)Kudo系唇形科独一味属植物，是重要的青藏高原药用植物和常用大宗藏药，为一级濒危藏药品种^[1]，《四部医典》和《晶珠本草》中记载本品有强筋骨，干黄水，止痛之功。现代临床用于活血止血、祛风止痛，广泛治疗跌打损伤、风湿痹痛、外科手术后的刀口疼痛、出血等症，对癌症疼痛亦有很好的抑制作用，且无成瘾性，开发前景极为广阔。我国现有生产含独一味及其提取物的现代制剂逾20种，如独一味胶囊、奇正消痛贴等知名品种。独一味药材来源全部依靠野生资源，近年来由于需求量剧增，连年过度采收造成可采资源急剧下降，为了保护日益减少的独一味野生资源，2010年版中国药典将其入药部位由全草修订为地上部分^[2]。

现代研究表明，独一味的活性成分主要有3类成分：环烯醚萜苷，具有很好的镇痛^[3]、止血、促凝血作用^[4]；苯乙醇苷和黄酮均具有镇痛活性^[5，6]。然而，现有关于独一味药材质量控制的报道多为采用HPLC法测定其中1～2类成分。如药典标准只测定了独一味地上部分中山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯这2种环烯醚萜苷的含量^[2]；潘正^[7]等同时测定了独一味根中4种环烯醚萜苷和2种苯乙醇苷；何映霞^[8]等同时测定了独一味地上部分中2种苯乙醇苷和2种黄酮。尚未见同时测定独一味中3类以上成分的报道。

发明内容

为了进一步完善独一味的质量控制标准，本发明拟采用HPLC法建立独一味的多指标含量测定方法，同时测定环烯醚萜苷、苯乙醇苷、黄酮及咖啡酰4类成分中部分化合物的含量，希望此方法能弥补现有研究的不足，进一步完善独一味的质量控制标准，为该药材的合理利用提供科学依据。

本发明提供了同时检测独一味中环烯醚萜苷、苯乙醇苷、黄酮、咖啡酰类成分的方法，它包括如下操作步骤：

(1)取待检药材，以甲醇或含水甲醇提取，制备供试品溶液；

(2)选择山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯、绿原酸、连翘酯苷B、麦角甾苷、芦丁和木犀草苷为对照品，制备对照品溶液；

(3)分别将对照品、供试品溶液注入高效液相色谱仪中，根据外标法检测独一味中上述7种成分即可，色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料

检测波长：山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯检测波长为238nm；绿原酸、连翘酯苷B和麦角甾苷检测波长为330nm；芦丁和木犀草苷检测波长为350nm；

流动相：流动相为A：乙腈-B：0.1％～0.3％磷酸水溶液，梯度洗脱程序：0～15min，12％～12％A；15～20min，12％～20.5％A；20～30min，20.5％～20.5％A。

本发明需要指出，由于独一味中所含的黄酮类成分和苯乙醇苷类具有相似的色谱保留行为，将这两大类成分完全分离具有较大难度，梯度条件变化时，这两类成分的多个色谱峰相对保留时间变化较大，甚至出现色谱峰位置的互换，因此在同一色谱条件下实现独一味中的黄酮类成分和苯乙醇苷类成分全部达到基线分离，实现对单一成分的含量测定是难点。本发明所建立的方法可同时分离测定连翘酯苷B、芦丁、麦角甾苷和木犀草苷这4个较难分离的成分。目前公开的独一味色谱条件，均不能实现同时对本发明中的7种成分进行含量测定。药典条件仅仅测定其中的两个环烯醚萜苷类成分：山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯。

进一步地，步骤(1)中，所述含水甲醇中甲醇浓度为50～80％v/v，优选为60％v/v。

更进一步地，步骤(1)中，提取的方法选自回流、超声、浸渍或渗漉。

进一步地，步骤(2)中，磷酸水溶液浓度为0.1％。

进一步地，所述色谱柱的尺寸为4.6mm×250mm，5μm。

更进一步地，色谱柱柱温为30±2℃。

本发明检测方法中，出峰数量较多，分离度良好，基线平稳，能够对独一味进行有效检测，为保障药材质量提供给了新的选择。本发明首次在同一色谱条件下检测了上述环烯醚萜苷、苯乙醇苷、黄酮及咖啡酰4类成分，共指认了7个具体化合物，可更全面更准确地用于独一味药材的质量控制。