[发明专利]伏马菌素B1的十二肽抗原模拟表位及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及伏马菌素B₁抗原模拟表位及其应用。

背景技术

伏马菌素B₁(Fumonisins B₁，FB₁)是一种常见的真菌毒素，主要由串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme) 产生研究表明，FB₁对人类及动物具有较强的毒性作用，包括神经毒性、生殖毒性、胚胎毒性及致畸致癌等，国际癌症研究中心已把FB₁化分为2B组，即对人类可能的致癌物。目前，多数国家已经对谷物、粮食及食品中FB₁的残留含量设定了限量标准，如联合国粮农组织（FAO）规定每日最大允许摄入 FB₁，FB₂，FB₃ 总量为 2 µg/kg 体重；瑞士规定粮食中 FB₁ 和 FB₂总残留限量为 1000 µg/L。

目前，检测食品中FB₁的方法主要有高效液相色谱、气相色谱、薄层色谱及免疫学检测等方法，免疫学检测方法以其灵敏度高、检测方便、成本低廉等优势在FB₁的检测中得到了广泛的应用。然而，在建立免疫学检测方法的过程中，必须使用FB₁标准品为原料来制备竞争抗原或者固相包被抗原，FB₁不仅价格昂贵而且具有极强的致癌性，对检测人员的健康和环境造成极大的威胁，从而在一定程度上制约了免疫学检测方法的应用和推广。有鉴于此，人们开始采用抗独特型抗体及抗原模拟表位技术来实现有害小分子物质标准品的替代，并取得了一定的进展。噬菌体展示肽库技术的主要特点是可有效地筛选出与目标靶体特异结合的噬菌体展示多肽，该技术在探索受体与配体之间相互作用结合位点、寻求高亲和力生物活性的配体分子、探索未知蛋白质空间结构表位、新型疫苗的研制等方面应用广泛。

本发明通过用噬菌体展示肽库技术，从肽库中筛选出能与靶分子（抗FB₁单克隆抗体）特异性结合的多肽（抗原模拟表位），该抗原模拟表位具有与天然FB₁分子相似的免疫反应特性，通过获得的FB₁抗原模拟表位，以代替价格昂贵且毒性强的FB₁标准品，并作为竞争抗原或固相包被抗原应用于FB₁的免疫学检测。

发明内容

本发明以抗FB₁单克隆抗体为靶分子，将靶分子固相包被于酶标板上，投入噬菌体随机展示十二肽库，进行亲和淘选，获得了七种FB₁的抗原模拟表位。它们的氨基酸序列如下：

NNAAMYSEMATD、FYTSPGRTSHYM、IHQELRYTKDSP、GDGVHKSHDIRG、TTLQMRSEMADD、SMLNDYRDYTTH、TRDKSSMLERWP。

本发明还涉及编码上述抗原模拟表位氨基酸序列的核苷酸序列，分别对应为：

AATAATGCGGCGATGTATTCGGAGATGGCTACTGA、TTTTATACTAGTCCGGGTCGGACGAGTCATTATATG 、ATTCATCAGGAGTTGCGTTATACTAAGGATTCTCCG、GGGGATGGGGTGCATAAGTCGCATGATATCCGTGGG、ACTACGCTTCAGATGCGTAGTGAGATGGCTGATGAT、TCGATGCTTAATGATTATCGTGATTATACTACTCAT、ACTCGGGATAAGTCGTCGATGTTGGAGCGTTGGCCG

上述抗原模拟表位（多肽）结构中，大写英文字母分别代表二十一种已知天然L-型氨基酸残基或其D-型异构体的一种，C代表半胱氨酸残基，D代表天冬氨酸残基，P代表脯氨酸残基，R代表精氨酸残基，K代表赖氨酸残基，H代表组氨酸残基，I代表异亮氨酸残基，V代表缬氨酸残基，Y代表酪氨酸残基，S代表丝氨酸残基，F代表苯丙氨酸残基，E代表谷氨酸残基，M代表甲硫氨酸残基，G代表甘氨酸残基，L代表亮氨酸残基，Q代表谷氨酰胺残基，W代表色氨酸残基，N代表天冬酰胺残基，A代表丙氨酸残基，T代表苏氨酸残基。