[发明专利]小反刍兽疫病毒重组蛋白抗原及其抗体快速检测试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及动物病毒抗体检测领域，特别是涉及一种用于小反刍兽疫病毒重组蛋白抗原和利用该重组蛋白抗原制备的小反刍兽疫病毒抗体的快速检测试纸条。

背景技术

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)又名小反刍兽假性牛瘟、肺肠炎、口炎肺肠炎复合症，是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的急性、烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将小反刍兽疫列为必须上报的动物疫病，我国农业部将小反刍兽疫列为一类动物疫病。小反刍兽疫严重影响反刍动物养殖业的健康发展及相关动物和动物产品的国际贸易，对疫区造成巨大的经济损失。小反刍兽疫具有患病率、死亡率高的特点，易感动物主要是山羊和绵羊，野生的小反刍动物亦可感染发病致死亡。该病在临床上的主要特征是发热、坏死性口炎、流涎、腹泻和肺炎。自小反刍兽疫首次于1942年在科特迪瓦爆发以来，在撒哈拉以南和赤道以北的多数非洲国家、中东到土耳其的几乎全部国家都有传播。2007年，该病首次在我国西藏阿里地区爆发，随后几年内，该病在西藏部分地区仍有发病，对西藏动物养殖业造成巨大的经济损失。2013年12月以来，在我国新疆、甘肃、内蒙、宁夏、江西、云南、河南、陕西、湖北、湖南、安徽、浙江、贵州、广西、陕西、吉林、黑龙江等省(市、自治区)连续发生小反刍兽疫疫情，而且疫情传播快、跨度大、风险高，给动物疫病防控工作带来了严重威胁。

小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科麻疹病毒属，其基因组为单股负链、无节段RNA。其RNA链从3'端至5'端依次分布着N-P-M-F-H-L，共6个基因，分别编码核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素蛋白(H)和多聚酶大蛋白(L)6种主要结构蛋白。其中N蛋白由525个氨基酸组成，在所有蛋白中属于保守蛋白，N蛋白在小反刍兽疫病毒各蛋白中含量最高、免疫原性最强，因此，N蛋白可以作为建立小反刍兽疫病毒抗体检测的重要抗原。

目前，可用于小反刍兽疫病毒抗体检测的方法有琼脂扩散试验(AGID)和竞争ELISA方法。由于琼脂扩散试验特异性较差，需要时间长等因素的制约，该方法在基层兽医部门很少应用。竞争ELISA具有较好的特异性和敏感性，可用于实验室检测。但由于ELISA检测需要专门的仪器设备和技术操作人员，所以，在条件较好的实验室才可以得到应用，并不适合作为快速检验的方法。

公告号为CN 101613766的发明专利公开了一种小反刍兽疫病毒的RT-LAMP试剂盒；公告号为CN 102676697的发明通过小反刍兽疫病毒N基因测序和比对，提供了用于检测小反刍兽疫病毒的遗传标记物、实时荧光定量PCR引物和探针，公开了对小反刍兽疫病毒进行定量检测的方法和检测试剂盒。以上方法虽然可以进行快速检验，但对检测过程有着较高的要求不能达到现场检测快速、简单、易操作的要求。而我国反刍动物养殖主要地区均位于西北边境地区，迫切需要可以满足现场检测和快速检测的工具。

胶体金免疫层析试纸条(immunochromatographic strip)是20世纪90年代初期的发展起来的一种快速免疫学检测方法，该方法具有检测快速、操作方便、特异性强、敏感性高、便于保存等特点。而目前，国内外尚速检测小反刍兽疫病毒的胶体金免疫层析试纸条或相关产品，用于小反刍兽疫病毒抗体的快速检测、现场检测和进出口动物检疫。

发明内容

本发明的目的在于克服现有小反刍兽疫病毒抗体检测方法的不足，提供一种具有敏感性高、特异性强、检测快速、操作方便小反刍兽疫病毒抗体检测方法。

本发明的内容涉及一种小反刍兽疫病毒重组蛋白抗原，其特征在于，所述重组蛋白抗原氨基酸序列为序列表SEQ ID No.1所示。

本发明的内容还包括所述的小反刍兽疫病毒重组蛋白抗原，在制备用于检测小反刍兽疫病毒抗体的试剂中的应用。

本发明的内容还包括一种编码所述的小反刍兽疫病毒重组蛋白抗原的核苷酸序列，其具体为序列表中SEQ ID No.2所示。

本发明的内容还包括用于所述的核苷酸序列特异性扩增的PCR引物，包括以下两条序列：

上游引物(P1)见序列表中SEQ ID No.3；

下游引物(P2)见序列表中SEQ ID No.4。

本发明的内容还包括所述的小反刍兽疫病毒重组蛋白抗原的制备方法，包括以下步骤：