[发明专利]N-脂肪酰基乙醇胺在制备水解酶抑制剂中应用

说明书

技术领域

本发明涉及N-脂肪酰基乙醇胺，尤其是涉及N-脂肪酰基乙醇胺在制备水解酶抑制剂中应用。

背景技术

棕榈酸乙醇胺(PEA)是一种内源性的具有保护性的调节物质，可以通过直接激活细胞核受体过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)，产生抗炎、镇痛等多种药理作用，可作用于中枢及感觉神经系统、免疫细胞等多个靶点而发挥镇痛抗炎作用(Mol Pharmacol 2005,67,15-19)。N-脂肪酰基乙醇胺水解酶(NAAA)能够特异性地水解PEA，使PEA在体内处于一种较低的水平(FEBS Lett,1999,454,267-270)，NAAA抑制剂可以有效地抑制NAAA活性，抑制PEA水解，提高PEA水平，达到治疗疼痛和炎症的作用(Proc Natl Acad Sci U S A,2009,106,20966-20971)。相比中枢类镇痛药，NAAA抑制剂的作用主要发生在外周系统以及炎症部位(Biochem J,2004,380,749-756)，对中枢神经系统影响比较小，无成瘾性；相比阿斯匹林等COX抑制剂型抗炎镇痛药，不会引起肠胃出血，具有更好的药物安全性。

发明内容

本发明旨在提供一种N-脂肪酰基乙醇胺在制备水解酶抑制剂中应用。

所述N-脂肪酰基乙醇胺的结构式如下：

式中：A可以是-H，-CH₃或-CH₂OH；B可以是-H，-CH₃，-NH₂，-OH或＝O；C可以是CO，SO，SO₂；D可以是含有15个C原子以内的各种取代或未取代的：直链烷基，支链烷基，环烷基，烯基，炔基或芳香基。

所述N-脂肪酰基乙醇胺的合成路线如下：

所述N-脂肪酰基乙醇胺的合成方法，包括以下步骤：

1)将吡咯烷衍生物和碱加入有机溶剂中，再加入相应的酰氯，反应得到含有相应的酰基吡咯烷的反应液；

2)在步骤1)所得的反应液中加入水进行淬灭反应，无机相用有机溶剂萃取，即可得到酰基吡咯烷的粗产物，经提纯得N-脂肪酰基乙醇胺。

在步骤1)中，所述有机溶剂可采用非极性有机溶剂，所述非极性有机溶剂可选自二氯甲烷、1,2－二氯乙烷、四氢呋喃、C2～C8的醚类、乙酸乙酯、丙酮等中的至少一种，所述有机溶剂的用量不限；所述吡咯烷衍生物与酰氯的物质摩尔比可为1∶(1.2～2)；所述碱可采用无机碱或有机碱，所述碱可选自碳酸钠，碳酸钾，氢氧化钠，氢氧化钾，三乙胺，吡啶等中的至少一种；所述吡咯烷衍生物与碱的物质摩尔比为1∶(1.5～2)；所述反应的时间可为1～5h，反应的温度可为0～60℃。

所制得的N-脂肪酰基乙醇胺的抑制活性可以通过以下方法检测：

将纯化的N-脂肪酰基乙醇胺水解酶蛋白与浓度梯度的待筛选化合物于37℃共同作用，加入含底物17∶1N-脂肪酰基乙醇胺的缓冲液再反应。加入含有脂肪酸的甲醇液终止反应。用HPLC-MS检测水解产物17∶1FA的产量，用Graphpad Prism5作图，以此测定得到待测化合物对N-脂肪酰基乙醇胺水解酶的IC₅₀值。

所述N-脂肪酰基乙醇胺可在制备水解酶抑制剂中应用。

所述水解酶抑制剂可用于检测细胞内PEA水平影响。所述水解酶抑制剂对细胞内PEA水平影响可通过以下方法检测：细胞与待测化合物共孵育4h，后用甲醇/水(1∶1，体积比)收集细胞，超声破碎细胞后用氯仿萃取；离心收集下层有机层，氮气吹干后用合适的溶剂重新溶解后用LC-MS检测PEA的含量。

棕榈酸乙醇胺(PEA)是一种内源性的具有保护性的调节物质，具有抗炎，镇痛等多种药理作用。N-脂肪酰基乙醇胺水解酶(NAAA)是PEA的特异性水解酶，NAAA抑制剂可以抑制NAAA的活性，提高体内的PEA水平，有潜在的抗炎镇痛的药理作用。

附图说明

图1为3000rpm离心收集下层有机层，氮气吹干后用3∶1甲醇/氯仿100μL重新溶解后用LC-MS检测内源性大麻素的含量。

具体实施方式

实施例1