[发明专利]GLP‑1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：

1)将GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白编码序列克隆至表达载体中；

2)将表达载体转染CHO-DXB11细胞，培养并筛选出阳性细胞株；

3)使用步骤2所得细胞表达、纯化后，即得所述融合蛋白；

所述GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白由重组人胰高血糖素样肽-1或其类似物通过连接肽与具有延长人体内半衰期作用的抗体Fc片段连接形成；

GLP-1或其类似物的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示；

连接肽的氨基酸序列如SEQ ID No：7所示；

抗体Fc片段为不具ADCC效应子功能的非裂解性Fc，抗体Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID No：9所示。

2.如权利要求1所述的一种GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No：10所示；所述GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白编码序列如SEQ ID No：12所示。

3.如权利要求1所述的一种GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述表达载体选自DHFR系统的表达载体或GS系统的表达载体。

4.如权利要求1所述的一种GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述将GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白编码序列克隆至表达载体中的方法具体为：在GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白编码序列的两端设计与载体的多克隆位点所对应的酶切位点，再将编码序列与载体上所对应的酶切位点连接，实现目标蛋白编码DNA片段与表达载体的连接。

5.如权利要求1所述的一种GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述将表达载体转染CHO-DXB11细胞，培养并筛选出阳性细胞株的方法具体为：使用DNA转染试剂将质粒DNA转染CHO-DXB11细胞，传代培养后通过测定融合蛋白的表达量，从而筛选出阳性细胞形成细胞株。

6.如权利要求1所述的一种GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述细胞表达的方法具体为：将筛选出的阳性细胞株进行无血清驯化，然后接种至摇瓶中摇床培养，将所得培养液离心取上清液进行蛋白纯化。

7.如权利要求1所述的一种GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述纯化的具体为通过膜过滤、亲和层析柱和凝胶过滤层析进行纯化。

8.一种融合蛋白，由如权利要求1-7任一权利要求所述的GLP-1或其类似物与抗体Fc片段融合蛋白的制备方法制备获得。

9.一种药物组合物，包括有效剂量的如权利要求8所述的融合蛋白，还包括载体、稀释剂、赋形剂、稳定剂、增稠剂中的一种或多种的组合。