[发明专利]含目标基因组DNA片段植株的选育方法有效
| 申请号： | 201410532337.7 | 申请日： | 2014-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN105567790B | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 周发松;喻辉辉;刘刚;杨燕宇;韦懿;陈光;姚玥;李菁;宋丁丁;李旭;潘丽;张学堂;陆青;邱树青;何予卿;李荣田;张启发 | 申请（专利权）人： | 中国种子集团有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/02;A01H1/04 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100045 北京市西*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 目标 基因组 dna 片段 植株 选育 方法 | ||
1.抗稻瘟病基因重组DNA片段，其特征在于，所述重组DNA片段从5′端至3′端由SEQ IDNo.1所示的核苷酸序列，SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之间的核苷酸序列，以及SEQ ID No.2所示的核苷酸序列组成；所述SEQ ID No.1和SEQ ID No.2之间的核苷酸序列包括水稻‘K22’中具有稻瘟病抗性的部分基因区段；
其中，SEQ ID No.1所示的核苷酸序列位于水稻第6染色体的10182031bp-10183804bp区间，SEQ ID No.2所示的核苷酸序列位于水稻第6染色体的10748091bp-10750733bp区间。
2.用于检测权利要求1所述抗稻瘟病基因重组DNA片段的方法，其特征在于，根据SEQID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，分别设计特异性PCR扩增引物，以待测水稻基因组为模板，进行PCR反应，并分析PCR扩增产物；
用于扩增及检测SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的引物组合为：
组合I
扩增引物：A08X21F:5’-AGCCCTGTCATTCTCGTGT-3’
A08X21R:5’-AAAGGACAGGTGGAGATGG-3’
测序引物：A08X21F:5’-AGCCCTGTCATTCTCGTGT-3’
组合II
扩增引物：A08X31F:5’-ACAAGCCCAGTTGGAGAATC-3’
A08X31R:5’-AAGGGCATACTGGAGAAGATG-3’
测序引物：A08X31F:5’-ACAAGCCCAGTTGGAGAATC-3’
A08X31F2:5’-GCTCGATGCTACTCATATGC-3’
组合III
扩增引物：A08X22F:5’-ACCCGTGGAAGCTGAAGGT-3’
A08X22R:5’-AAACCGATCCGAAACCACC-3’
测序引物：A08X22F2:5’-GCCTGTGTGTGTCAGATGAGC-3’
用于扩增及检测SEQ ID No.2所示的核苷酸序列的引物组合为：
组合IV
扩增引物：A08X35F:5’-GATGACGTGTCACCCTGAC-3’
A08X35R:5’-ATGAGCCGATCTCTATGAGAG-3’
测序引物：A08X35R:5’-ATGAGCCGATCTCTATGAGAG-3’
A08X35R2:5’-GGTGTCATTTCCGCGTTGG-3’
组合V
扩增引物：A08X46F:5’-CATGCACGATGGCTCTATCATGCA-3’A08X46R:5’-GATGTGACCAGTGCAACTTCGTCA-3’
测序引物：A08X46F3:5’-GATTCTGGATGTAACATGAGA-3’。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用Sanger测序法分析PCR扩增产物。
4.权利要求2中用于扩增SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示核苷酸序列的引物组合I～V在检测含抗稻瘟病基因重组DNA片段植株中的应用，其中所述引物的定义同权利要求2中所述。
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