[发明专利]人类免疫缺陷病毒1型实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种人类免疫缺陷病毒1型实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，具体包括：捕获探针、HIV‑1引物T7引物和nT7引物、HIV‑1检测探针、M‑MLV反转录酶和T7 RNA聚合酶等试剂。本发明方法能够高特异性、高灵敏度、低污染、快速地对含有人类免疫缺陷病毒1型的血清或血浆样品进行核酸扩增检测，具有检测效率高，准确度高的特点，能够检测出HIV的所有型，包含M、N、O群所有亚型，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及病毒的生物医学检测技术领域，具体涉及将特异性靶标捕获技术和实时荧光核酸恒温扩增检测技术结合的人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）的实时荧光核酸恒温扩增检测中使用的引物、探针及相关试剂盒。

背景技术

人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）是导致一种慢性致死性疾病艾滋病（Acquired immune defiiency syndrome,AIDS）的病原微生物。由于艾滋病具有传染性和高致死性，因此已经成为世界范围内重点防控的主要疾病之一。自第一例艾滋病病例于1981首次报告艾滋病病例以来，到目前为止，艾滋病已造成超过两千五百万人死亡。中国自1985年首次发现艾滋病病例以来，艾滋病的流行呈快速爬升倾向。近年来，中国艾滋病的感染与发病人数也增长较快。中国艾滋病现状，据联合国驻华机构显示的数据，目前中国艾滋病病毒感染者约84万人，加上已经过世的24万人，总数应在100万人左右。根据世界卫生组织预测，目前虽然中国艾滋病病毒携带者占总人口的比例虽然很低，但感染总人数在亚洲位居第2位，在全球居第14 位。鉴于中国是世界人口基数最大，人口最为密集的国家，一旦艾滋病大规模流行将成为一场公共卫生灾难。

根据HIV基因结构、免疫学和流行病学的特征，HIV被分为HIV-1和HIV-2 两大类，HIV-1的感染力较强，在世界各地广为流行，而HIV-2主要集中在非洲西部、欧洲、美国，南美的一些地区也偶有报道。

HIV病毒为逆转录病毒，其基因具有显著的多样性，不同的地区和民族，HIV流行的基因型不同。境内流行的HIV主要为M组HIV-1型（目前境内尚未见HIV-1 N组和O组的报道，HIV-2型感染病例的报道极少），其基因型主要为B/B’、BC重组型（包括CRF 07_BC重组型和CRF 08_BC重组型）以及AE重组型（CRF 01_AE重组型）。而且，HIV-1基因型具有一定的地域差异，不同的地区流行的HIV基因型也不尽相同，如CRF 07_BC重组型流行于四川、新疆等地，而CRF 08_BC重组型则流行于广西等地。

HIV 有十分高的遗传变异率，它是一个多态性病毒，从不同的AIDS 患者体内分离出的病毒结构表现出一定的差异，事实上，独立分离到的HIV-1和2彼此都不相同，这是由于病毒传播过程中突变，缺失或插入引起的，高度变异区在env基因内，相当于gp120 的五个区段，gag 和pol 基因较少变异，因此，只有选择病毒基因组中高度保守区域作为目的基因加以扩增，才能有效地检测所有HIV的变异性。

核酸检测主要涉及核酸提取与和核酸扩增检测。

目前血清和血浆中病毒核酸的提取方法主要有离心柱提取法及磁珠法。柱提取法操作过程复杂，效率低，且不易于实现自动化；磁珠法能快速实现核酸的分离与纯化，易于实现自动化操作。

目前国内已批准上市的HIV荧光定量PCR检测试剂仅有3-4种，且检测灵敏度低，约在1000IU/ml 左右；对于小于1000IU/ml的样本无法检出，不能满足临床检测的需求。