[发明专利]一种生产（1S,3R) 亚环己基二氧基庚烯醇的方法

说明书

技术领域

本发明属于制药工程技术领域，特别涉及到耶氏解脂假丝酵母细胞生物催化制备手性医药中间体(1S,3R)-1,2-（亚环己基二氧基）庚-6-烯-3-醇的技术。

背景技术

手性亚环己基二氧基）庚-6-烯-3-醇是合成手性药物、精细化学品、农药品和其他特殊材料的重要中间体。生物催化不对称合成具有环境友好、条件温和、选择性高等优点,作为绿色高效制备手性化合物的优先途径,被越来越多地应用于生产一些高附加值的手性化合物。生物催化制备手性亚环己基二氧基）庚-6-烯-3-醇具有很好的应用前景。

生物催化具有催化效率高、选择性强、条件温和、环境友好等突出优点,是可持续发展过程中替代和拓展传统有机化学合成的重要方法。其中手性拆分和不对称合成是生物催化最具吸引力的应用领域。在作为生物催化剂的六大类酶中,水解酶能够催化动力学拆分外消旋体得到手性产品,在工业生物催化中一直扮演着重要角色。近几年来,氧化还原酶在工业上的应用得到了迅速增长。目前,采用水解酶动力学拆分法、生物还原法和生物氧化法工业制备光学活性手性化合物的比例为4:2:1。

 (1S,3R)-1,2-（亚环己基二氧基）庚-6-烯-3-醇是合成手性药物、精细化学品、农药品的重要手性砌块，由于有2个手性中心，使得化学合成较为困难，成本高。本发明将采用生物催化制备(1S,3R)-1,2-（亚环己基二氧基）庚-6-烯-3-醇。

发明内容

本发明采用耶氏解脂假丝酵母细胞催化制备(1S,3R)-1,2-（亚环己基二氧基）庚-6-烯-3-醇，反应式如下：

底物S-亚环己基甘油醛（1）和4-溴-1-丁烯（2）经耶氏解脂假丝酵母催化反应，得到产物(1S,3R)-1,2-（亚环己基二氧基）庚-6-烯-3-醇（3）。有多种微生物可以催化此反应，经过大量实验筛选，最终确定采用耶氏解脂假丝酵母作为催化剂，因为其催化反应1和2反应的效果最好，反应收率、对映体过量率（ee%）均很高。

许多耶氏解脂假丝酵母都可以进行生物催化此反应，然而，其效果不同，相差很大，经实验，本发明选用耶氏解脂假丝酵母菌株为ATCC 20510  ，其催化反应效果最佳。

培养介质：

1、　斜面培养基配制如下：马铃薯200 g 葡萄糖20 g 琼脂20 g 水1000 mL 马铃薯去皮切成块煮沸30 min 然后用纱布过滤再加葡萄糖及琼脂溶化后补足水至1000 mL;

2、种子培养基成份为: 葡萄糖5g/L，酵母浸膏10g/L， 尿素10，KH₂PO₄ 2g/L， MgSO₄ 7H₂O 0.5g/L， 配制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉；

3、培养液成份为：葡萄糖20-25 g/L， 酵母浸膏10-15 g/L， KH₂PO₄ 4.4-5.5 g/L， MgSO₄ 7H₂O 0.5-0.6 g/L，玉米油5-7 g/L， 黄豆粉16-20 g/L, pH值为7.8。

酵母细胞制备。耶氏解脂假丝酵母经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，耶氏解脂假丝酵母经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，装料系数为0.6-0.7，121℃高压灭菌30分钟，冷却至28-29℃，将耶氏解脂假丝酵母种子液接种至发酵罐，接种比例为6-6.5％，通气比为0.5-1V/（V分钟），28-29℃培养42-48小时，用过滤式离心机离心得到湿酵母细胞，用作生物催化反应催化剂。